洗板目的在於(yu) 將特異性結合於(yu) 固相上的抗原(抗體(ti) )與(yu) 溫育過程中吸附的非特異性成份分離,使免疫複合物與(yu) 待測抗體(ti) (抗原)呈一定比例,洗板是否合格直接影響檢測結果的準確性。洗板應嚴(yan) 格按照說明控製洗板時間及洗板次數,ELISA 檢測一般用洗滌液洗板3 次,洗滌液應嚴(yan) 格按照操作說明進行稀釋, 洗液應注滿每個(ge) 微孔並注意洗液不外溢,垂直甩板避免交叉汙染,防止出現假陰性及假陽性結果。使用洗板機洗板可一定程度上避免環境汙染、提高工作效率,洗滌開始時注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底並吸幹孔內(nei) 全部液體(ti) , 嚴(yan) 格按照要求設置一定的洗板時間及洗板次數。洗板過程中注意衝(chong) 力大小,避免衝(chong) 力過大導致酶結合物丟(diu) 失,吸光度值偏低。洗液應根據不同的酶標板調整注水量, 注意不要溢出孔外; 稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中,使配出的洗液pH 在7.2~7.6 範圍內(nei) ,用非金屬容器保存,保持液體(ti) 新鮮無汙染、沉澱。洗板結束後將板拍幹, 應垂直扣在備好的幹淨的吸水紙或毛巾上,且注意每次更新幹淨的吸水紙或毛巾。
洗板時還應注意以下問題:
(1) 需每天校正注液量及殘液量, 洗滌後殘液量不得大於(yu) 2μl;
(2)及時更換破損吸液針,避免破壞底板包被;
(3)針對不同酶標板注意調整吸液頭下降高度, 避免衝(chong) 洗針頭卡住酶標板;
(4)注意調整洗液量,洗液量過多將溢出,過少將達不到洗滌效果;
(5)關(guan) 機前使用蒸餾水衝(chong) 洗管道,避免洗液的結晶物堵塞管道;
(6)不同種試劑盒的洗液嚴(yan) 禁混合使用。臨(lin) 床操作中, 工作人員由於(yu) 擔心洗板次數過少達不到去除非特異性物質的理想效果而增加洗板次數,zui近研究發現,隨著洗板次數的增加樣本檢測的OD 值降低,造成假陰性結果及灰區標本的漏檢。