真菌的培養(yang) 方法
1、鋼環法
(1)材料:白假絲(si) 酵母菌、沙保弱培養(yang) 基、無菌玻片、蓋玻片、鋼環(帶有缺 口)、石蠟。
(2)方法
①用無菌鑷子取無菌小培養(yang) 鋼環,環的兩(liang) 麵分別蘸取熔化的固體(ti) 石蠟,平置於(yu) 無菌載玻片上,另取一無菌蓋玻片,在酒精燈火焰上加熱後覆蓋於(yu) 鋼環上,待冷後,小培養(yang) 鋼圈即被固定於(yu) 載玻片與(yu) 蓋玻片之間。
②用毛細滴管吸取融化的培養(yang) 基,從(cong) 鋼環上端孔注入,注入量占容積的1/2即可。
③培養(yang) 基冷卻凝固後,用接種針挑取材料,由上端孔接種於(yu) 環內(nei) 培養(yang) 基上。
④置濕盒內(nei) ,室溫或37℃下培養(yang) 2—3d後,逐日觀察,鏡下可連續看到真菌生長過程及菌絲(si) 、孢子等特征,一般7d左右即可長好。
⑤也可不用小培養(yang) 鋼環,直接將融化的培養(yang) 基滴於(yu) 無菌玻片上,待冷凝後從(cong) 周邊接種材料,用蓋玻片覆蓋後培養(yang) ,在顯微鏡下連續觀察生長情況。
(3)結果:鏡下觀察可見到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌絲(si) 。
2、小塊瓊脂玻片培養(yang) 法
用無菌操作法將製好的待用瓊脂平板用無菌接種針或接種環切成大約1cm2的方塊,將其放置於(yu) 滅菌的載玻片上。將標本或待檢菌接種於(yu) 瓊脂塊四周邊緣靠上方部位,然後用無菌鑷子取一無菌的蓋玻片蓋在瓊脂上。在無菌平皿內(nei) 放入少量無菌水和一個(ge) 無菌U形(或V形)玻璃棒。將此載玻片置於(yu) 玻璃棒上,蓋上平皿蓋培養(yang) 。每日用肉眼和顯微鏡觀察孢子和菌絲(si) 的特點。