xl18luck新利進口大鼠如何解決(jue) 產(chan) 生組織切片非特異性染色

1、 抗體(ti) 孵育時間過長、抗體(ti) 濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體(ti) 來控製。

2、 一抗用多克隆抗體(ti) 易出現非特異性著色，建議試用單克隆抗體(ti) 看看。

3、內(nei) 源性過氧化物酶和生物素在肝髒、腎髒等組織含量很高(含血細胞多的組織)，需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;

4、 非特異性組分與(yu) 抗體(ti) 結合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果;

5、 DAB孵育時間過長或濃度過高;

6、 PBS衝(chong) 洗不充分，殘留抗體(ti) 結果增強著色，在一抗、二抗或SP孵育之後的浸洗尤為(wei) 重要;

7、 標本染色過程中經常出現幹片，這容易增強非特異性著色。

解決(jue) 方案

1、首先排除抗體(ti) 孵育條件。一般來說，著色效果的好壞與(yu) 抗體(ti) 的孵育條件是密不可分的，由於(yu) 用SP法已經做出來過一次且效果不錯，因此對於(yu) 同樣組織的同一抗原進行分析，這種因素可以先排除。

2、其次，DAB孵育時間是否太長?做出來那一次我是孵育8min，後來也是8-10min，我單獨做了一次實驗來排除該因素。結果孵育2、5min時先出現背景，而特異性染色較淺，故這不符合常理，一般先出現特異性染色，然後隨著時間的延長，會(hui) 出現非特異性背景著色。

3、zui後，血清封閉的問題?以前我一般孵育15-30min，所以我單獨做了一次實驗用血清封閉室溫1h，其它條件同做出來的那一次，結果也一樣背景著色很深。

4、對PBS清洗不斷地延長時間和增加次數，甚至*參照試劑盒說明書(shu) 來進行操作(我以前一般一抗4度且室溫複溫45min、二抗37度30min、Sp反應37度30min)，以及過氧化氫滅活加強等等均未起到效果。

5、步驟和組織切片*與(yu) *次做出來的一致(包括血清也是老試劑盒內(nei) 剩餘(yu) 的一點)，奇跡出現了：結果很好。--因為(wei) 抗原抗體(ti) 反應除溫度、抗原/抗體(ti) 濃度外，然後就是PH值，於(yu) 是我測了新抗體(ti) 稀釋液、老抗體(ti) 稀釋液和PBS的PH值，結果是前者偏酸性(<6、0)，而後兩(liang) 者均在7、5左右。