ELISA競爭(zheng) 抑製法基本操作問題分析

兩(liang) 對半使用elisa方法，其中HBSAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體(ti) 夾心法檢測，而HBcAb、HBeAb使用競爭(zheng) 抑製法檢測。 而競爭(zheng) 抑製法的原理：酶標抗體(ti) 與(yu) 樣本抗體(ti) 在同樣的體(ti) 係中，與(yu) 固相抗原競爭(zheng) 結合是等比關(guan) 係。原論上講，應該先將樣本與(yu) 酶標抗體(ti) 先行混勻，然後加入反應也進行。但實際工作中並非如此，都是分開加入反應孔。這樣會(hui) 造成先加入的先結合，與(yu) 後加入者並不是公平的關(guan) 係，因而也不符合等比原則。特別是在放置時間長，且溫度高的情況下，對結果有很大的影響。

將陰性標本94份並用生理鹽水進行1：30稀釋，在加入標本後按下表時間放置後再加入酶標抗體(ti) ，然後檢測結果如下：

放置時間(min)陰性標本數臨(lin) 界值-標本A450nm值假陽性率(%)<0.30.3~0.7>0.70751036026813767.4565158610.6105616121020.2203818172139.3302112184357.4

從(cong) 上表可以看出，如果同時加入標本與(yu) 酶標抗體(ti) ，沒出現假陽性現象。2分鍾後再加入酶標抗體(ti) ，由於(yu) 標本比酶標抗體(ti) 先結合了兩(liang) 分鍾，因此出現了7.4%的假陽性。30分鍾後再加，假陽性高達57.4%。因此建議競爭(zheng) 抑製法的項目，加十個(ge) 樣本後立即加酶標抗體(ti) ，這樣對檢測結果沒有影響。