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與大家分享xl18luck新利進口大鼠實驗的操作流程
更新時間:2017-06-01   點擊次數:1267次

前期準備工作:
實驗前樣本和試劑盒室溫平行1小時,如果樣本是凍存樣本,應提前拿到2-8攝氏度進行解凍(不建議直接室溫解凍)
準備好實驗所需耗材,蒸餾水(去離子水)。
操作流程描敘:
1,將要進行實驗的版孔進行設定好,標準品5個(ge) 點,每個(ge) 點設定平行,需要用到10個(ge) 孔,空白隻需1個(ge) 孔。剩下孔可以做為(wei) 樣本孔
2,稀釋標準,準備好5個(ge) EP管,然後在每個(ge) EP管中加入150微升標準稀釋液,編上編碼,分別為(wei) 1,2,3,4,5,在1號管中加入150標準品,用槍頭反複吹打10次左右(注意控製幅度不要過大容易產(chan) 生氣泡)如果有渦旋儀(yi) 可以在渦旋儀(yi) 上渦旋5秒左右,然後換槍頭,在1號管中取150微升加入到2號管,後麵過程一次類推。zui後稀釋完,前麵4個(ge) 管中每管液體(ti) 在150微升,5號管為(wei) 300微升。濃度是從(cong) 大到小。
3,標準、樣本、空白加樣:標準是每個(ge) 濃度點2個(ge) 孔(做平行),每孔加入50微升,加樣過程中注意換槍頭,樣本孔中每孔加入50微升,加樣過程中注意換槍頭,空白孔加入50微升蒸餾水。特別要說明的是,標準加樣和樣本加樣盡量控製在15分鍾內(nei) 加完,如果時間拖的太長,會(hui) 導致前麵孔先反應後麵孔才開始反應,這樣數值偏差過大。加完樣後蓋上封板膜,至37攝氏度孵育30分鍾.
4,洗版,在孵育過程中可以將洗滌液配好,20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗滌液(不要漫過版孔),(如果有震蕩儀(yi) 的話,可以講板子放入震蕩儀(yi) 上5秒左右,然後靜止三十秒,沒有請忽略次過程)將板子在桌子上晃動5秒左右,然後靜置30秒,甩幹,拍板。說明:甩幹過程盡量要快,1秒內(nei) 就可以完成,不要慢慢傾(qing) 斜倒掉液體(ti) ,直接翻板甩掉液體(ti) 即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙,版孔朝下拍幾下,拍幹區別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為(wei) 完成。
5,每孔加入50微升的酶標試劑,此處在空白孔中不需要加(空白孔為(wei) 空),孵育30分鍾。
6,洗版同步驟4
7,顯色,先每孔中加入50微升的顯色A液,然後每孔中加入50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鍾
8,終止,每孔加入50微升的終止液,注意,加完終止液必須在15分鍾內(nei) 讀數,超過時間讀數無效。在規定時間內(nei) 讀數都是有效的。
至此,整個(ge) 實驗結束。
需要額外提醒的是:在做完整個(ge) 實驗過儀(yi) 器之前,儀(yi) 器預熱半小時,這個(ge) 計算好時間,也可以直接將儀(yi) 器一直開著,直到整個(ge) 實驗結束。
在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部,一般槍頭都懸空,可以將槍頭靠在孔邊緣,但槍頭尖懸空,如果槍頭上殘留液體(ti) 看整體(ti) 多少量,不要吹打下去。特別忌諱在版孔內(nei) 壁流向版孔。整個(ge) 加液過程不要產(chan) 生氣泡。(洗滌液除外)

 

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