標本及采集、貯運因素:
(1)xl18luck新利進口大鼠嚴(yan) 重溶血,以HRP 為(wei) 標記的ELISA 測定中,殘留在孔內(nei) 的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;
(2)混有紅細胞的血清 易沉澱或附著在聚乙烯孔內(nei) 不易洗淨;
(3)如有細菌汙染,菌體(ti) 中可能含有內(nei) 源性HRP,也會(hui) 產(chan) 生假陽性反應;
(4)標本凝固不全,有時為(wei) 了爭(zheng) 取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA 測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;
(5)采血試管洗滌不*、反複使用易交叉汙染;
(6)塑料試管能吸附抗原物質 ,樣本久置在塑料管內(nei) 會(hui) 使樣本內(nei) 抗原含量下降造成假陰性。
ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應後,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深於(yu) (競爭(zheng) 法則淺於(yu) )陰性對照;與(yu) 陰性對照的顏色接近者,判定為(wei) 陰性。
2)以樣品孔的OD值大於(yu) 陰性對照OD值+2~3SD,作為(wei) 陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大於(yu) 或等於(yu) 2.1為(wei) 陽性;P/N值小於(yu) 2.1,但大於(yu) 1.5為(wei) 可疑;P/N小於(yu) 1.5為(wei) 陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。