可用於(yu) 測定抗原,也可用於(yu) 測定抗體(ti) 。在這種測定方法中有三個(ge) 必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體(ti) ,即"免疫吸附劑";(2)酶標記的抗原或抗體(ti) ,稱為(wei) "結合物";(3)酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體(ti) 條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。
雙抗體(ti) 夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
(1)將特異性抗體(ti) 與(yu) 固相載體(ti) 聯結,形成固相抗體(ti) 。洗滌除去未結合的抗體(ti) 及雜質。
(2)加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與(yu) 固相抗體(ti) 結合,形成固相抗原抗體(ti) 複合物。 洗滌除去其他未結合物質。
(3)加酶標抗體(ti) ,保溫反應。固相免疫複合物上的抗原與(yu) 酶標抗體(ti) 結合。*洗滌未結合 的酶標抗體(ti) 。此時固相載體(ti) 上帶有的酶量與(yu) 標本中受檢抗原的量相關(guan) 。
(4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為(wei) 有色產(chan) 物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨(lin) 床檢驗中,此法適用於(yu) 檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。隻要獲得針對受檢抗原的異性抗體(ti) ,就可用於(yu) 包被固相載體(ti) 和製備酶結合物而建立此法。如抗體(ti) 的來源為(wei) 抗血清,包被和酶標用的抗體(ti) 分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體(ti) ,一般選擇兩(liang) 個(ge) 針對抗原上不同決(jue) 定簇的單抗,分別用於(yu) 包被固相載體(ti) 和製備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體(ti) 一起保溫反應,作一步檢測。
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體(ti) 及酶標抗體(ti) 結合,而不再形成"夾心複合物"。類同於(yu) 沉澱反應中抗原過剩的後帶現象,此時反應後顯色的吸光值(位於(yu) 抗原過剩帶上)與(yu) 標準曲線(位於(yu) 抗體(ti) 過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結果將低於(yu) 實際的含量,這種現象被稱為(wei) 鉤狀效應(hook effect),因為(wei) 標準曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴(yan) 重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測範圍的zui高值。用高親(qin) 和力的單克隆抗體(ti) 製備此類試劑可削弱鉤狀效應。
雙抗體(ti) 夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的幹擾。RF是一種自身抗體(ti) ,多為(wei) IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體(ti) 夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與(yu) 固相抗體(ti) 和酶標抗體(ti) 結合,表現出假陽性反應。采用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由於(yu) 去除了Fc段,從(cong) 而消除RF的幹擾。雙抗體(ti) 夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為(wei) 這類試劑的一項考核指標。
規格: ≥95% 8-Gingerol *: 8-薑酚
規格: ≥98% 9-Aminocamptothecin *: 9-氨基喜樹堿
規格: ≥98% Alpha-asarone *: Alpha-細辛腦
規格: ≥98% Apiosesylskimmin *: Apiosesylskimmin
規格: ≥98% Menisdaurin *: Menisdaurin