透明帶（Zona pellucida，ZP）是圍繞在卵細胞周圍的一圈嗜酸性、明膠樣結構。ZP有很強的免疫原性，能誘發機體(ti) 產(chan) 生全身與(yu) 局部的細胞與(yu) 體(ti) 液免疫，產(chan) 生抗透明帶抗體(ti) （anti-zonapellucidaantibody，AZP）。AZP與(yu) 女性不孕症有關(guan) 。檢測AZP的方法有免疫沉澱反應，間接免疫熒光法，間接血凝，膠乳凝集試驗，RIA及ELISA法等。無論何種檢測方法，均需透明帶抗原。由於(yu) 豬和人卵透明帶有共同抗原，故可用豬卵透明帶抗原作試驗。以下介紹間接ELISA法檢測AZP。

     1．試劑  ZP精製抗原：用注射器從(cong) 新鮮豬卵巢中吸取卵泡液，在解剖鏡下從(cong) 卵泡液中收集卵子，用PBS洗數次，放在含0．1％枸櫞酸鈉的0．05mol／LPBS（pH7．0）中，強力振蕩lmin，然後用PBS洗幾次。再將卵子加熱溶解後可獲得熱溶解抗原，即豬ZP的粗製抗原。經SephadexG-100凝膠過濾組分後便可獲精製抗原。可選用高70cra，直徑1．2cra的層析柱。凝膠柱用0．01mol／L，pH7．4PBS流洗平衡後，加樣，再用PBS洗脫，分管收集。將*蛋白峰用30％聚乙二醇或變色矽膠濃縮，經PBS透析24h後即為(wei) ZP精製抗原。

   2．操作步驟  每孔用0．1mLZP精製抗原（濃度用方陣法滴定）包被，置4~C過夜，用洗滌液洗3次，每次3min：每孔加含10％小牛血清的PBS 0．1mL，37~C封閉30rain，用洗滌液洗3次。加待測血清0．1mL，37℃!h後洗3次。加zui適濃度HRP-羊抗人IgC 0．1mL，37~C反應1h，洗滌。加新鮮配製的底物溶液，每孔0．1mL，室溫作用20min後，各孔加2mol／LH2S040．1mL終止反應。

     3．注意事項  如果用豬ZP做為(wei) 抗原檢測人血清AZP，待測血清須用豬紅細胞吸收。如用人卵ZP作為(wei) 抗原，待測血清須用AB型人紅細胞吸收。

    4．結果判定與(yu) 臨(lin) 床意義(yi)   與(yu) 陽性、陰性對照血清參比，目測顯黃棕色者為(wei) AZP陽性， 無色或極淡黃色為(wei) 陰性。也可測492nm的吸光度（A）值。若待測標本A值大於(yu) 或等於(yu) 陰性對照血清A值的X+2．5S為(wei) 陽性。