操作流程:
檢測抗體(ti) 多用間接型elisa。以純化抗原包被載體(ti) ,經4℃,以無關(guan) 蛋白封閉至少2小時以上,加入待測樣品,室溫孵育1小時,洗滌幹淨後加酶標抗體(ti) ,再經室溫孵育、洗滌後,以底物顯色,顯色到一定程度終止反應,在酶標儀(yi) 上讀結果或以肉眼判斷。
類型:elisa具體(ti) 方法的類型繁多,試劑的標準化問題還未zui後解決(jue) ,溫育的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數等都是影響測定的因素。但參考以上基本過程,無論怎樣變化,均離不開抗原-抗體(ti) 反應、酶標抗體(ti) 的免疫學反應及酶催化作用。
特點:
1、敏感性高,可檢出濃度在ug~mg/ml水平;
2、特異性強;
3、重複性好;
4、快速、簡便、廉價(jia) 。
實驗條件
固相載體(ti) :可作為(wei) 固相載體(ti) 的物質很多,如:纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯葡聚糖、玻璃、矽橡膠、瓊脂糖凝膠等。可以各種形式出現;試管、微量反應板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯製品,其吸附性。固相包被的機製一般不外乎物理吸附和共價(jia) 交聯,
封閉:以無關(guan) 蛋白占據載體(ti) 上未被包被的空隙,常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待測樣品:稀釋度要合適,濃度太大會(hui) 發生非特異性吸附造成假陽性,過分稀釋會(hui) 影響抗原-抗體(ti) 之間的免疫學反應。選擇zui適稀釋度,在實驗體(ti) 係中取光密度在1.0左右的稀釋度為(wei) 宜。
酶結合物:使用高質量的酶結合物是elisa成功的關(guan) 鍵。
注意事項
酶聯免疫技術的試劑標準化問題尚未完*,溫育過程的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數都是影響zui後測定的因素。為(wei) 使實驗得到滿意的結果,在操作過程中應作到
1、每次試驗都必須設陽性和陰性對照。
2、封閉要*。
3、洗滌要測定。
山柰酚 含量測定 20mg 110861-200808
山柰素 含量測定 20mg 110861-200808
銀杏內(nei) 酯C(暫行) 含量測定 20mg 110864-200505
銀杏葉對照提取物 鑒別 700mg 110866-200803
三七總皂苷 含量測定 100mg 110870-200001
三七莖葉皂苷 鑒別 50mg 110871-200201
精氨酸 鑒別 100mg 110872-
丙氨酸 鑒別 100mg 110873-9802
纈氨酸 鑒別 100mg 110874-200203