在操作過程中總是會(hui) 出現或大或小的問題，比如說花板、假陽性、全顯色、信號值比空白還低等等。

 下麵就由我拋磚引玉地來說一下，做xl18luck新利的經驗總結：

1、包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guan) 係到你做出的抗體(ti) 可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴(yan) 格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(ge) 道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對於(yu) 生物素和脂類物質或小分子物質我們(men) 要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下：①親(qin) 和素生物素：先親(qin) 和素先包被載體(ti) ，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用於(yu) 。②脂類物質：可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解後加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹幹，待酒精揮發後，讓脂質自然幹固在固相表麵。③小分子必須依靠和大的蛋白載體(ti) 偶聯後才能固定在固相載體(ti) 上。

2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩衝(chong) 液。但有時由於(yu) 試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩衝(chong) 溶液來包。應注意以下原理：xl18luck新利由於(yu) 蛋白質與(yu) 聚苯乙烯固相載體(ti) 是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與(yu) 固相載體(ti) 表麵的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體(ti) 表麵。具體(ti) 的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩衝(chong) 液，還有pH7.2的磷酸鹽緩衝(chong) 液和pH7-8的Tris-HCL緩衝(chong) 液等等。

3、封閉：繼包被之後用高濃度的無關(guan) 蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guan) 的蛋白質充填這些空隙，從(cong) 而排斥後的步驟中幹擾物質的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價(jia) 廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清 （主要為(wei) 了排除相似蛋白幹擾）和酪蛋白等等。但zui終選用什麽(me) ，要依據試驗具體(ti) 來實踐。

 peripherin 酪氨酸蛋白激酶受體(ti) B6抗體(ti)

 PERK 酪氨酸蛋白激酶Fyn（同步原癌基因）抗體(ti)

 Persephin 酪氨酸蛋白激酶A4受體(ti) 抗體(ti)

 Pescadillo 酪氨酸蛋白激酶A4抗體(ti)

 PFK2/PFKFB3 賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體(ti)

 PFKFB1 辣椒素受體(ti) 抗體(ti)

 PFKFB2 辣根過氧化物酶標記聚組氨酸抗體(ti) 標簽抗體(ti) IgG

 PFKL/Fructose 6 Phosphate Kinase 醌氧化還原酶抗體(ti)

 PGAM1/PGAM2 跨膜受體(ti) 蛋白Notch-3抗體(ti)

 PG-C 跨膜受體(ti) 蛋白Notch-2抗體(ti)

 PGE2 跨膜受體(ti) 蛋白Notch-1抗體(ti)