在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體(ti) 及酶標抗體(ti) 結合，而不再形成"夾心複合物"。類同於(yu) 沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於(yu) 抗原過剩帶上）與(yu) 標準曲線（位於(yu) 抗體(ti) 過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於(yu) 實際的含量，這種現象被稱為(wei) 鉤狀效應（hook effect），因為(wei) 標準曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴(yan) 重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測範圍的zui高值。用高親(qin) 和力的單克隆抗體(ti) 製備此類試劑可削弱鉤狀效應。

假使在被測分子的不同位點上含有多個(ge) 相同的決(jue) 定簇，例如HBsAg的a決(jue) 定簇，也可用針對此決(jue) 定的同一單抗分別包被固相和製備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞(ya) 型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(ge) 亞(ya) 型，雖然每種亞(ya) 型均有相同的a決(jue) 定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。

雙抗體(ti) 夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的幹擾。RF是一種自身抗體(ti) ，多為(wei) IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體(ti) 夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與(yu) 固相抗體(ti) 和酶標抗體(ti) 結合，表現出假陽性反應。采用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於(yu) 去除了Fc段，從(cong) 而消除RF的幹擾。雙抗體(ti) 夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為(wei) 這類試劑的一項考核指標。

 Ulex Europaeus Lectin 1/UEA1 B細胞特異性轉錄因子抗體(ti)

 Unrip/STRAP B細胞遷移基因2抗體(ti)

 UQCRC2 B細胞活化因子受體(ti) 抗體(ti)

 UQCRFS1 B淋巴細胞粘附分子CD22抗體(ti)

 URG4 B-淋巴細胞趨化因子抗體(ti)

 URG4 (C terminal) B淋巴細胞連接蛋白抗體(ti)

 Urocortin B淋巴細胞成熟因子抗體(ti)

 Urocortin B和T淋巴細胞衰減蛋白抗體(ti)

 Urocortin 3 BLAME抗體(ti)

 UROD BK通道蛋白抗體(ti)

 USF-1 BH3結構域凋亡誘導蛋白抗體(ti)

 USP1 BECLIN-1抗體(ti)