免疫測定技術的基礎在於(yu) 抗原抗體(ti) 之間的特異結合反應,所以任何的確診試劑離不開的質料,如抗原抗體(ti) ,酶等。曾經用於(yu) 免疫測定的抗原一般為(wei) 各種純化抗原,而抗體(ti) 則為(wei) 純化抗原免疫動物後獲得的多克隆抗體(ti) 和運用雜交瘤技術得到的單克隆抗體(ti) ,而抗原或抗體(ti) 的符號物如酶標結合物則通過各種化學合成方法製備。近年來,跟著分子生物學的展開,運用基因工程方法製備各種特別的。

操作方法：
雙抗體(ti) 夾心法：
1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) 1～10μg/ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 
隔夜。次日，棄去孔內(nei) 溶液，用洗刷緩衝(chong) 液洗3次，每次3分鍾。（簡稱洗刷，下同）。
2、加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然後洗刷。（一同做空白孔，陰性對照孔及
陽性對照孔）。
3、加酶標抗體(ti) ：於(yu) 各反應孔中，參與(yu) 新鮮稀釋的酶標抗體(ti) （經滴定後的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗刷。
4、加底物液顯色：於(yu) 各反應孔中參與(yu) 暫時製作的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鍾。
5、中止反應：於(yu) 各反應孔中參與(yu) 2M硫酸0.05ml。
6、效果斷定：可於(yu) 白色布景上，直接用肉眼查詢效果：反應孔內(nei) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為(wei) 無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號標明。也可測OD值：在ELISA檢測儀(yi) 上，於(yu) 450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大於(yu) 規則的陰性對照OD值的2.1倍，即為(wei) 陽性。