在檢測中有一個(ge) 詞叫包被,我們(men) 生物界將抗原或抗體(ti) 固定在過程稱為(wei) 包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體(ti) 結合到固相載體(ti) 表麵的過程。蛋白質與(yu) 聚苯乙烯固相載體(ti) 是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與(yu) 固相載體(ti) 表麵的疏水基團間的作用力。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。
載體(ti) 對不同蛋白質的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體(ti) 表麵。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯結多發生在Fc段上,抗體(ti) 結合點暴露於(yu) 外,因此抗體(ti) 的包被一般均采用直接吸附法。
蛋白質抗原大多也可采用與(yu) 抗體(ti) 相似的方法包被。當抗原決(jue) 定簇存在於(yu) 或鄰近於(yu) 疏水區域時,抗原與(yu) 固相載體(ti) 的直接吸附可使抗原決(jue) 定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體(ti) 作預包被,其後通過抗原抗體(ti) 反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體(ti) 表麵,其抗原決(jue) 定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體(ti) 的親(qin) 和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重複性亦佳。間接包被的另一優(you) 點是抗原用量少,僅(jin) 為(wei) 直接包被的1/10乃至於(yu) /100。
不易吸附在聚苯乙烯載體(ti) 上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測抗DNA抗體(ti) 時,需用DNA作為(wei) 包被抗原,而普遍的固相載體(ti) 一般不能直接與(yu) 核酸結合。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附性能。固相載體(ti) 先用堿性蛋白質,如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包被,也可提高核酸的結合力。也可用親(qin) 和素生物素係統作間接包被,即用親(qin) 和素先包被載體(ti) ,然後加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用於(yu) 各種抗原物質的定量測定。
脂類物質無法與(yu) 固相載體(ti) 結合,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解後加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風吹幹,待酒精揮發後,讓脂質自然幹固在固相表麵。抗心磷脂抗體(ti) 的ELISA試劑一般采用這種包被方式。