包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重複性亦佳。間接包被的另一優(you) 點是抗原用量少,僅(jin) 為(wei) 直接包被的1/10乃至於(yu) /100。不易吸附在聚苯乙烯載體(ti) 上的非蛋白質抗原可采用。例如,在檢測抗DNA抗體(ti) 時,需用DNA作為(wei) 包被抗原,而普遍的固相載體(ti) 一般不能直接與(yu) 核酸結合。
方法一 用於(yu) 檢測未知抗體(ti) 的間接法: 用包被緩衝(chong) 液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。人xl18luck新利加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體(ti) )0.1ml於(yu) 上述已包被的反應孔中置37℃孵育1小時洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
於(yu) 反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(ti) (抗抗體(ti) )0.1ml,37℃孵育30-60分鍾,洗滌,zui後一遍用DDW洗滌。
將抗原或抗體(ti) 固定在過程稱為(wei) 包被。換言之,包被即是抗原或抗體(ti) 結合到固相載體(ti) 表麵的過程。蛋白質與(yu) 聚苯乙烯固相載體(ti) 是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與(yu) 固相載體(ti) 表麵的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、人xl18luck新利濃度等的影響。載體(ti) 對不同蛋白質的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,因此更易吸附到固相載體(ti) 表麵。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯結多發生在Fc段上,抗體(ti) 結合點暴露於(yu) 外,因此抗體(ti) 的包被一般均采用直接吸附法。