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酶聯免疫吸附法(ELISA)
更新時間:2019-03-27   點擊次數:1895次

酶聯免疫吸附法(ELISA)
原理:可用於(yu) 測定抗體(ti) ,也可用於(yu) 檢測杭原。其基本原理是采用抗原與(yu) 抗體(ti) 的特異反應將待測物與(yu) 酶連接,然後通過酶與(yu) 底物產(chan) 生顏色反應,用於(yu) 定量測定。測定的對象可以是抗體(ti) 也可以是抗原。3種必要的試劑: ①固相的抗原或抗體(ti) (免疫吸附劑); ②酶標記的抗原或抗體(ti) (標記物); ③酶作用的底物(顯色劑)。

ELISA過程包括:抗原吸附在固相載體(ti) 上,這個(ge) 過程稱為(wei) 包被,加待測抗體(ti) , 再加相應酶標記抗體(ti) ,生成抗原--待測抗體(ti) --酶標記抗體(ti) 的複合物,再與(yu) 該酶的底物反應生成有色產(chan) 物。借助分光光度計的光吸收計算抗體(ti) 的量。

根據檢測目的和操作步驟不同,有以下三種類型的常用方法:

a、間接法  
此法是測定抗體(ti) zui常用的方法。將已知抗原吸附於(yu) 固相載體(ti) 。加人待檢標本(含相應抗體(ti) )與(yu) 之結合。洗滌後,加人酶標抗球蛋白抗體(ti) (酶標抗抗體(ti) )和底物進行測定。

b、雙抗體(ti) 夾心法  
此法常用於(yu) 測定抗原。將已知抗體(ti) 吸附於(yu) 固相載體(ti) ,加人待檢標本(含相應抗原)與(yu) 之結合。溫育後洗滌,加人酶標板中。

c、競爭(zheng) 法  
此法可用於(yu) 抗原和半抗原的定量測定,也可用於(yu) 測定抗體(ti) 。以測定抗原為(wei) 例,將特異性抗體(ti) 吸附於(yu) 固相載體(ti) 。加入待測抗原和一定量的酶標已知抗原,使二者竟爭(zheng) 與(yu) 固相抗體(ti) 結合;經過洗滌分離,zui後結合於(yu) 固相的酶標抗原與(yu) 待測抗原含量呈負相關(guan) 。

 

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