有許多植物就是由於(yu) 未能有效地分離純化其組織中的RNA, 而阻礙了其分子生物學方麵研究的進展。這些植物組織中,或富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級代謝產(chan) 物,或RNase的活性較高。在完整的細胞內(nei) 這些物質在空間上與(yu) 核酸是分離的,但當組織被研磨,細胞破碎後,這些物質就會(hui) 與(yu) RNA相互作用。酚類化合物被氧化後會(hui) 與(yu) RNA不可逆地結合,導致RNA活性喪(sang) 失及在用苯酚、氯仿抽提時RNA的丟(diu) 失,或形成不溶性複合物;而多糖會(hui) 形成難溶的膠狀物,與(yu) RNA共沉澱下來;萜類化合物和RNase會(hui) 分別造成RNA的化學降解和酶解。對於(yu) 這些植物材料,用常規的RNA提取方法(如胍法、苯酚法和十六烷基*基溴化胺法等)難以提取出其RNA!
縱觀上RNA提取的試劑盒,如常見的TRIzol,以及一些的RNA提取試劑盒均很難從(cong) 多糖多酚的植物中提取高質量的RNA,酚類物質的含量會(hui) 隨著植物的生長而增加。因而從(cong) 幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外,針葉類植物的針葉中多酚的含量比在落葉植物的葉子中要高得多。在植物材料勻漿時,酚類物質會(hui) 釋放出來,氧化後使勻漿液變為(wei) 褐色,並隨氧化程度的增加而加深,這一現象被稱為(wei) 褐化效應。被氧化的酚類化合物(如醌類)能與(yu) RNA穩定地結合,從(cong) 而影響RNA的分離純化;多糖的汙染是提取植物RNA時常遇到的另一個(ge) 棘手的問題。植物組織中往往富含多糖,而多糖的許多理化性質與(yu) RNA很相似,因此很難將它們(men) 分開。在去除多糖的同時RNA也被裹攜走了,造成RNA產(chan) 量的減少;而在沉澱RNA時,也產(chan) 生多糖的凝膠狀沉澱,這種含有多糖的RNA沉澱難溶於(yu) 水,或溶解後產(chan) 生粘稠狀的溶液。由於(yu) 多糖可以抑製許多酶的活性,因此汙染了多糖的RNA樣品無法用於(yu) 進一步的分子生物學研究。
Trizol主要成份是異硫氰酸胍和苯酚,沒有特殊去除多糖和多酚的試劑,所以對於(yu) 大多數多糖多酚的植物無法成功提取,即使添加了如2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)或半胱氨酸之類的防止酚氧化的試劑也很難提取。RNeasy Plant Mini Kit主要裂解液是鹽酸胍或則異硫氰酸胍。