為(wei) 您帶來實驗優(you) 化做到這五點,下個(ge) 大神就是您!

一、封閉液、洗滌液及保護液的優(you) 化
    1.封閉液的優(you) 化：采用文獻報道的方法進行封閉。其封閉液的組成為(wei) ：10mM磷酸鹽緩衝(chong) 液含1%的牛血清白蛋白(BSA)。
    2.洗滌液的配製：采用文獻報道的方法配製洗滌液。
    3.酶標板保護液的優(you) 化：酶標板經過封閉後在低溫下僅(jin) 能存放2周左右，為(wei) 了延長固相酶標板上抗原的穩定性，我們(men) 增加了一步保護酶標板的程序。在10mM的磷酸鹽中加入適量的糖、無關(guan) 蛋白質、慶大黴素以及二價(jia) 金屬離子，作為(wei) 酶標板保護劑，在封閉完後加入保護液於(yu) 4℃冰箱中孵育放置一個(ge) 晚上，同時與(yu) 未做保護的酶標板進行對照，然後將保護的及未保護的酶標板置於(yu) 37烘箱中放置15天，考察保護液對酶標板的穩定性的影響。

二、酶標抗體(ti) 稀釋度的優(you) 化
    抗原包被濃度為(wei) 4ug/ml,將酶標抗體(ti) 做係列稀釋：1:100，1:200；1:300；1:400；1:500；1:600；1:1000；經孵育、洗滌後、顯色終止後，用自動酶標儀(yi) 分析，選擇A值為(wei) 1.5左右的酶標抗體(ti) 稀釋度為(wei) zui適工作濃度。
 

三、底物液的優(you) 化
    常用的作為(wei) 酶聯免疫吸附試劑有OPD和TMB係統，由於(yu) OPD有致癌的危險性以及用前需要溶解等諸多缺點，因此我們(men) 選用TMB作為(wei) 底物係統，采用文獻報道的方法：取適量的TMB溶解在DMSO中，然後加入適量的超純水，配製作為(wei) 底物B液；溶解適量的過氧hua氫尿素於(yu) 100mM磷酸-檸檬酸緩衝(chong) 液中，配製作為(wei) 底物A液，用前將底物A液及底物B液等體(ti) 積混合。在文獻報道的基礎上，上海樊克適當調整了TMB的用量以及過氧hua氫尿素的用量，並加入了酶促進劑，與(yu) 文獻報道的底物進行比較。實驗方案為(wei) ：將活化的辣根過氧hua物酶分別作1:1000；1:10000；1:100000；1:200000；1:400000；1:800000等係列稀釋，比較兩(liang) 種不同配方的底物的靈敏度。
 

四、抗原抗體(ti) 反應時間的優(you) 化：
    抗原抗體(ti) 反應會(hui) 隨著時間的增加，反應量也增加，但達到一定的時間後，反應即達到平衡，我們(men) 取反應10min，20min，30min，40min，50min，60min，70min,90min等8個(ge) 點進行比較，以確定zuijia抗原抗體(ti) 反應時間。
 

五、底物作用時間的優(you) 化
    在其它條件相同的情況下，我們(men) 取5min,10min,15min,20min,25min,30min,35min,40min,50min,60min,80min等11個(ge) 時間點進行比較，確定zuijia的底物作用時間。