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ELISA實驗背景深全部呈有色原因及解決辦法
更新時間:2019-09-25   點擊次數:2968次

中,背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)

根據技術分析,可能存在的原因有一下幾條:

1、實驗過程中洗滌不充分,洗後未拍幹,樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留

  解決(jue) 辦法:洗液準確配製;充分洗滌,靜置15秒,*拍幹。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用,不要反複使用,否則易造成汙染。

2、底物汙染,未避光保存,出現顏色

解決(jue) 辦法:棄去底物,重新配置

3、樣品稀釋液汙染

  解決(jue) 辦法:棄去稀釋液,重新配置

4、吸頭重複使用,未洗淨或消毒不*

  解決(jue) 辦法:吸頭盡可能一次性使用

5、沒有正確封閉

  解決(jue) 辦法:在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間

6、樣本溶血嚴(yan) 重

  解決(jue) 辦法:建議使用非溶血或輕微溶血樣本,嚴(yan) 重溶血樣本會(hui) 導致背景偏高。

7、不正確的孵育時間,溫度(尤其是底物孵育的時間)

  解決(jue) 辦法:zui為(wei) 常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。*按照說明書(shu) 要求

8、偶聯抗體(ti) (streptavidin-HRP)濃度過高

  解決(jue) 辦法:按照說明書(shu) 調整到合適的濃度

9、ELISA板子不正確的貯存

  解決(jue) 辦法:酶標板貯存於(yu) 2-8 ℃;使用結合力低點的Elisa板

 

 

 

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