操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體(ti) 產(chan) 生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chan) 生加樣上的誤差。
2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋後加入50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。
3）加入稀釋好後的標準品50ul於(yu) 反應孔、加入待測樣品50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。立即加入50ul的生物素標記的抗體(ti) 。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5）每孔加入80ul的親(qin) 和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。
6）甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鍾。避免光照。
8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

牛腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒局限
6號標準品以上的結果為(wei) 非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。