原理
本實驗采用雙抗體(ti) 夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 C4 單抗包被於(yu) 酶標板上，標準品和樣品中的 C4與(yu) 單抗結合，加入生物素化的抗大鼠C4，形成免疫複合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與(yu) 生物素結合，加入底物工作液顯藍色，zui後加終止液硫酸，在450nm處測OD值，C4濃度與(yu) OD值成正比，可通過繪製標準曲線求出標本中C4濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標板（Coated Wells） 96孔 酶標抗體(ti) 工作液（Enzyme Conjugate） 12ml
10×標本稀釋液（Sample Buffer） 12ml 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） 50ml
標準品（Standards）：1600ug/瓶 2瓶 底物工作液（TMB Solution） 12ml
*抗體(ti) 工作液（Biotinylated Antibody） 12ml 終止液（Stop Solution） 12ml
準備試劑與(yu) 收集血樣
1. 收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yang) 上清液、組織勻漿、尿液等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反複凍融。所有標本測定前用標本稀釋液作1：20稀釋（取10ul，加標本稀釋液190ul,稀釋20倍）。
2. 標準品液配製：使用前加入2ml蒸餾水混勻，配成800ug/ml的溶液。設標準管8管，每管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入800ug/ml的標準品溶液300ul混勻後用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反複作對倍稀釋，從(cong) 第七管中吸出300ul棄去。第八管為(wei) 空白對照。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻後置37℃120分鍾。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印幹。
3. 每孔中加入*抗體(ti) 工作液100ul。將反應板充分混勻後置37℃60分鍾。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標抗體(ti) 工作液100ul。將反應板置37℃30分鍾。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鍾。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鍾內(nei) 用酶標儀(yi) 在450nm處測吸光值。
結果計算與(yu) 判斷
1. 所有OD值都應減除空白值後再行計算。
2. 以標準品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0 ug/ml為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應C4含量，再乘上稀釋倍數即可。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的C4 檢測濃度小於(yu) 3ug/ml。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠C4。不與(yu) 大鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重複性：板內(nei) 、板見變異係數均小於(yu) 10.6％。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做複孔，每次測定應同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關(guan) 鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。
3. 板條開封後剩餘(yu) 板條要再封好，保持板條幹燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅(jin) 用於(yu) 科研，不能用於(yu) 臨(lin) 床診斷！
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