實驗步驟：
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標本，具體(ti) 操作參見該試劑盒說明書(shu) 。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置於(yu) 1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體(ti) ，加入等體(ti) 積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置於(yu) 吸水紙上，棄盡液體(ti) 或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘餘(yu) 液體(ti) 甩到管底部，用微量加樣器盡量吸幹液體(ti) ，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配製
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與(yu) n×1?l RT-PCR酶（n為(wei) 反應管數）,振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置於(yu) PCR管中，然後將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置於(yu) 定量熒光PCR儀(yi) 上，推薦循環參數設置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環45次;單點熒光檢測在60℃，反應體(ti) 係為(wei) 25?l。

【標本要求】
人體(ti) 鼻腔或咽部分泌物:用無菌撚拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球將試管塞緊後，密閉送檢。標本可立即用於(yu) 檢測，也可保存於(yu) -20℃待測。