產(chan) 品特點:
1. 使用化學修飾的熱啟動聚合酶,反應特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應緩衝(chong) 液經充分優(you) 化,反應靈敏快速,40個(ge) 循環隻需20多分鍾;
3. 抗幹擾能力強,反應重複性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的複雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應體(ti) 係中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個(ge) PCR進程,後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與(yu) Q分開,發熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nei) 標定量:
內(nei) 標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數恒定,受環境因素影響小,內(nei) 標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。