猴痘病毒PCR檢測試劑盒使用方法:
一、樣品 RNA 的製備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉錄）反應合成 cDNA
1. 按下表配製 RT 反應體(ti) 係（20 μL 體(ti) 係）
2. 70℃保溫 5 分鍾變性模板後立即冰浴。
3. 嚴(yan) 格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），
反應終體(ti) 積為(wei) 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鍾。此步為(wei) RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鍾以終止反應，然後放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為(wei) PCR 模板使用，丌需要純化。

檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻後置 37 ℃ 120 分鍾。
2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印幹。
3.  每孔中加入抗體(ti) 工作液10 0ul 。將反應板充分混勻後置 37 ℃ 6 0 分鍾。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標抗體(ti) 工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鍾。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應15 分鍾。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鍾內(nei) 用酶標儀(yi) 在 45 0 nm 處測 吸光值。