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四角瑞氏絛蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒實驗步驟
更新時間:2021-05-20   點擊次數:986次

實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鍾使其*溶解。
②兩(liang) 相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體(ti) 15秒後,15到30℃孵育2到3分鍾。4℃下12000rpm離心15分鍾。離心後混合液體(ti) 將分為(wei) 下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配於(yu) 水相中。水相上層的體(ti) 積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中。加等體(ti) 積異丙醇混合以沉澱其中的RNA,混勻後15到30℃孵育10分鍾後,於(yu) 4℃下12000rpm 離心10分鍾。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側(ce) 壁上形成膠狀沉澱塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配製),清洗RNA沉澱。混勻後,4℃下7000rpm離心5分鍾。
⑤RNA幹燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-10分鍾。
⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存於(yu) -80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)後,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

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