腦粘體(ti) 蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟：

一、樣品DNA的製備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決(jue) 定檢測靈敏度的關(guan) 鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，後麵的PCR再靈敏也不能提高整體(ti) 檢測靈敏度。
二、製備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個(ge) 10倍稀釋度為(wei) 例。由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分）。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染性病原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 病毒做陽性對照，隻提供沒有傳(chuan) 染性的、可以直接使用的DN段作為(wei) 陽性對照。
1. 標記6個(ge) 離心管，分別為(wei) 6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩衝(chong) 液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鍾，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從(cong) 6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鍾，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從(cong) 5號管中取5 μL溶液到4號管中，重複上麵的操作直到得到6個(ge) 稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從(cong) 1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個(ge) 樣品做3次重複。PCR後得到每個(ge) 陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，並以之為(wei) 縱軸，以濃度的對數值為(wei) 橫軸，繪製標準曲線。