PCR檢測試劑盒的具體使用步驟您都了解嗎?
PCR檢測試劑盒中含有聚合酶鏈式反應所需要各種試劑組分,如:引物、dNTPs、緩衝液、Taq酶等,PCR反應液混合液中加入檢測樣品,即可進行PCR擴增反應。PCR擴增產物經瓊脂糖電泳染色判斷,陽性樣本將在相應大小的片段處出現特異性條帶。
PCR檢測試劑盒的具體使用步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩衝鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩衝甘油、搪瓷桶三隻、有蓋搪瓷盒一隻、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.0mol/L,pH7.4的PBS於待檢標本片上,十分鍾後棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置於有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鍾為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.0mol/L,pH7.4的PBS衝洗後,再按順序過0.0mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鍾,並不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多餘水分,但不使標本幹燥,加一滴緩衝甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
PCR檢測試劑盒的特點:
1準確可靠,臨床雙盲對照試驗>000例,結果與金標準測序法比對,結果*性大於99%。
2高靈敏:可檢測低至0ng的人基因組DNA。
3快速:整個檢測流程隻需3小時。
4簡便:試劑盒提供預混好的試劑,使體係配置操作簡便。
5防汙染
6高特異性:雙重特異性組成,保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需*配對,才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產物配對,在延伸中產生熒光。