實驗操作步驟:
1. 標準品的稀釋與(yu) 加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在、第二孔中分別加標準品100μl,然後在、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然後從(cong) 孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻後從(cong) 第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從(cong) 第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從(cong) 第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋後各孔加樣量都為(wei) 50μl,濃度分別為(wei) 1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘(yu) 各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為(wei) 5倍)。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體(ti) ,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行。
phospho-Androgen Receptor (Ser213)磷酸化雄激素受體(ti) 抗體(ti)
phospho-Androgen Receptor (Ser650)磷酸化雄激素受體(ti) 抗體(ti)
phospho-AKT1+2+3 (Tyr315+316+312) 磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗體(ti)
phospho-AKT1(Thr34)磷酸化蛋白激酶B抗體(ti)
phospho-ATF2(Ser472)磷酸化活化複製因子2抗體(ti)
3-Apr凋亡相關(guan) 蛋白3抗體(ti)
ATG18自噬相關(guan) 蛋白18抗體(ti)
ATG4A自噬相關(guan) 蛋白4A抗體(ti)
APOA4載脂蛋白A4抗體(ti)
ALOX1212脂氧合酶抗體(ti)
Angiotensin III血管緊張素III抗體(ti)
ADCY3腺苷酸環化酶3抗體(ti)
Angiomotin血管動蛋白抗體(ti)
Adenovirus 5 E1A腺病毒早期E1A蛋白抗體(ti)
phospho-ATF2 (Ser44)磷酸化活化複製因子2抗體(ti)
phospho-ATF2 (Ser94)磷酸化活化複製因子2抗體(ti)
phospho-ATXN1(Thr236)磷酸化失調症蛋白1抗體(ti)
ANKRD17錨蛋白重複結構域蛋白17抗體(ti)
ALDH1A1胞質乙醛脫氫酶1抗體(ti)
ARL3ADP核糖基化樣因子ARL3抗體(ti)
15 Lipoxygenase 1花生四烯酸15脂氧合酶1抗體(ti)
ABC2乳腺癌增強蛋白2抗體(ti)
Alpha 1 microglobulinα1微球蛋白抗體(ti)