試驗原理:
Dopamine試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Dopamine濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nei) 進行檢測。先將Dopamine和生物素標記的抗體(ti) 同時溫育。洗滌後,加入親(qin) 和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然後加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產(chan) 生顏色。顏色的深淺和樣品中Dopamine的濃度呈比例關(guan) 係。
試劑盒內(nei) 容及其配製
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配製
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:1600ng/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書(shu) 進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩衝(chong) 液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標記的抗Dopamine抗體(ti) 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親(qin) 和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩衝(chong) 液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書(shu) 進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體(ti) ,請盡快用水衝(chong) 洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。
操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書(shu) 儲(chu) 存,使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟(diu) 棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉汙染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍幹,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露於(yu) 光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書(shu) 中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管。收集血液後,1000×g離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於(yu) 檢測。1000×g離心30分鍾去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鍾去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鍾,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備