操作步驟:

1 . 切片常規脫蠟至水。如需抗原修複,可在此步後進行

⒉ 緩衝(chong) 液洗  3min/2  次。

⒊ 為(wei) 了降低內(nei) 源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分鍾。

⒋ 緩衝(chong) 液洗  5min/2  次。

⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室溫下孵育  5  分鍾以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過  10  分鍾,否則會(hui) 導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有  5  -  10%  正常羊血清,這一步可以省略。)

⒍ 緩衝(chong) 液洗  5min/2  次。

⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小時。(具體(ti) 孵育時間和溫度由試驗者最終決(jue) 定)

⒏ 緩衝(chong) 液洗  5min/2  次。

9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增強子),在室溫下孵育  20  分鍾。

10  .緩衝(chong) 液洗  5min/2  次。

11  .滴加  HRP Polymer (酶標二抗) ,在室溫下孵育  30  分鍾。

(注: HRP Polymer  對光敏感,應避免不必要的光暴露並儲(chu) 存在不透明的小瓶中。)

12  .緩衝(chong) 液洗  5min/2  次。

13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混勻後滴加到切片上,孵育  3  -  15  分鍾。(具體(ti) 時間由染色深淺決(jue) 定。)

14  .自來水充分衝(chong) 洗,複染 ,脫水,透明,封片。

HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內(nei) 皮細胞)

IBRS-2(豬腎細胞)

IMR-32(人神經母細胞瘤細胞)

J82(人膀胱癌細胞)

JAR(人胎盤絨毛膜癌細胞)

JEG-3(人絨毛膜癌細胞)

JeKo-1(人套細胞淋巴瘤細胞)

Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴細胞白血病細胞)

K-562(人慢性骨髓性白血病細胞)

KB(人口腔表皮樣癌細胞)

KG-1(人急性骨髓性白血病細胞)

KLE(人子宮內(nei) 膜癌細胞)

KU812(人外周血嗜堿性白血病細胞)

L1210(小鼠白血病細胞)

L6(大鼠成肌細胞)

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纖維

Lec1(倉(cang) 鼠卵巢細胞)

Li-7(人肝癌細胞)

LLC(小鼠肺癌細胞)

LLC-MK2(恒河猴腎細胞)

LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞)

Lncap clone FGC(人前列腺癌細胞)

LoVo(人大腸癌細胞)

LS-174T(人結腸腺癌細胞)

LTEP-a-2(人肺腺癌細胞)

MA-782(小鼠乳腺癌細胞)