操作規程：

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yang) 基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(you) 質胎牛血清，10%。

2）培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲(chu) 存。

二．細胞處理：

1）複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水麵要低於(yu) 凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yang) 基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入1mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜。第二天換液並檢查細胞密度。

2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 懸浮細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

小鼠苗條素(OB)xl18luck新利

小鼠苗條素(LEP)xl18luck新利

小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)xl18luck新利

小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)xl18luck新利

小鼠可溶性CD80(sCD80/B7-1)xl18luck新利

小鼠可溶性CD80(sCD80)xl18luck新利

小鼠巨細胞集落刺激因子(GM-CSF)xl18luck新利

小鼠巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)xl18luck新利

小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)xl18luck新利

小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2)xl18luck新利

小鼠膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)xl18luck新利

小鼠堿性成纖維細胞生長因子9(FGF9)xl18luck新利