PCR檢測試劑盒使用前後的注意事項
PCR檢測試劑盒裏分好幾部分，重要的是PCR反應體係：DNA聚合酶，鎂離子，引物（測2個基因和1個內標需要3對引物），探針（也要3對探針，發出三種波長的熒光），逆轉錄酶，dNTP（ATUCG會用部分U代替T），還有用於抗幹擾的UDG酶（正常的DNA隻有ATCG，PCR擴增出來的DNA會有AT（會用部分U代替T）CG，這樣擴增出來的DNA鏈中有U，UDG酶能切斷含U的DNA鏈，所以擴增DNA在空氣中形成的氣溶膠，不會影響其他樣本）、RNA酶抑製劑（空氣中液體裏全都是RNA酶，會降解病毒的RNA）、Taq酶的抗體（Hotstart，常溫下能抑製Taq酶的活性，PCR擴增時高溫讓其失活，Taq酶就在高溫時恢複活性開始擴增了）。
一、試劑盒使用注意事項
（1）所有試劑應按照適合溫度儲存。請勿反複凍融。
（2）使用後均需要對操作區進行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。
二、樣本注意事項
（1）細胞在含/不含血清的環境中均可直接使用試劑盒。
（2）擴增2kb以內片段，細胞樣品濃度不超過1000個細胞。如若擴增片段超過2kb，可適當提高細胞濃度。
（3）不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進行處理，防止交叉汙染導致檢測結果偏差。
三、試劑盒使用過程中注意事項
（1）PCR過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。
（2）整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，防止形成環境汙染。
（4）PCR產物3’末端含有A，可直接進行TA克隆。
四、試劑盒使用後注意事項
（1）PCR反應完成後，嚴禁在實驗區開蓋。應在汙染區進行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠汙染。
（2）為防止試劑盒汙染，請勿將不同批號試劑盒混用。
在線客服