準備步驟:
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA複製,而不能從(cong) 無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀(yi) 有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀(yi) 上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui後在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chan) 物放置於(yu) 4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
血管緊張素原抗體(ti)
雄激素受體(ti) 抗體(ti)
細胞死亡調節蛋白抗體(ti) (凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑製劑)
軸蛋白1抗體(ti)
自噬相關(guan) 蛋白9B抗體(ti)
自噬相關(guan) 蛋白12抗體(ti)
自噬相關(guan) 蛋白13抗體(ti)
自噬相關(guan) 蛋白3抗體(ti)
磷酸化活化複製因子2抗體(ti)
磷酸化APP(Tyr757)澱粉樣肽前體(ti) 蛋白抗體(ti)
去整合素樣金屬蛋白酶18抗體(ti)
活化轉錄因子6抗體(ti)
銜接蛋白β抗體(ti)
銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體(ti)
水通道蛋白-9抗體(ti)
膜粘連蛋白A3抗體(ti)
膜粘連蛋白 A4抗體(ti)
自噬相關(guan) 蛋白8A抗體(ti)