中汙染的預防與(yu) 清除
一、汙染的預防
預防是防止細胞培養(yang) 過程中發生汙染的辦法。隻有預防工作做在前，才能將發生汙染的可能性降到zui小程度。一般預防可從(cong) 以下幾方麵著手：
（一）從(cong) 操作者做起
1、操作者責任心要強，要細心穩重，操作技術要熟練。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鍾，按規定穿隔離衣。進入後關(guan) 好門，坐下來盡量少走動。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴(yan) 格檢查器材、溶液和培養(yang) 物，不要把汙染品或未經消毒的物品帶入無菌室內(nei) ，更不能隨便使用，以免造成大批汙染。
2、操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內(nei) 打開瓶口，並將瓶口轉動燒灼。操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應轉向背麵。
3、操作時要常更換吸管，切勿一根吸管做到底。一旦發現吸管口接觸了手和其他汙染物品應棄去。實驗完畢及時收拾，保持實驗室清潔整齊，zui後用消毒水浸泡的紗布擦台麵。
（二）從(cong) 物品、用品消毒滅菌著手
細胞培養(yang) 所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，並在無菌試驗陰性後才能使用。操作室及剩餘(yu) 的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
（三）防止細胞交叉汙染
在進行多種細胞培養(yang) 操作時，所用器具要嚴(yan) 格區分，做上標記便於(yu) 辨別。並按順序進行操作，避免一起進行時易發生混亂(luan) 。
在進行換液或傳(chuan) 代操作時，注射器和滴管不要觸及細胞培養(yang) 瓶瓶口，以免把細胞帶到培養(yang) 液中汙染其他細胞。
所有細胞一旦購置，或從(cong) 別處引入，或自己建立，均應及早留種凍存，一旦發生汙染可棄之複蘇，重新培養(yang) 。
二、汙染的清除
培養(yang) 細胞一經汙染，多數較難處理。如果汙染細胞價(jia) 值不大，宜棄之；有細胞株留存的或可購置的，可在尋找原因後*消毒操作室，複蘇或重新購置細胞，再培養(yang) 。若汙染細胞價(jia) 值較大，又難於(yu) 重新得到，可采取以下辦法清除。
（一）使用抗生素
抗生素對殺滅細菌較有效。聯合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比汙染後再用藥效果好。預防用藥一般用雙抗生素（青黴素100u/mL加鏈黴素100μg/mL），汙染後清除用藥需采用大於(yu) 常用量5～10倍的衝(chong) 洗法，於(yu) 加藥後作用24～48小時，再換常規培養(yang) 液。此法在汙染早期可能有效。所用抗生素品種除青黴素、鏈黴素外，還可用慶大黴素、卡那黴素、多粘菌素、四環素、製黴菌素等。常用400～800μg/mL卡那黴素或200μg/mL四環素處理，每隔2～3日換液1次，傳(chuan) 1～2代進行治療。近年來有報道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleromutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體(ti) 有效。這三種抗生素均用PBS配成250X濃縮液，-20℃保存備用，使用濃度Cip為(wei) 10μg/mL，BM-1為(wei) 10μg/mL，BM-2為(wei) 5μg/mL。使用時先吸除汙染的培養(yang) 液，加入含BM-1的RPMI1640培養(yang) 液，3天後再吸除培養(yang) 液，加入含BM-2的RPMI1640培養(yang) 液，培養(yang) 4天，如此連續3個(ge) 輪次，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體(ti) 後，再加正常培養(yang) 液培養(yang) 傳(chuan) 代3-4次。
（二）使用支原體(ti) 特異性血清
用5%的兔支原體(ti) 免疫血清（血凝效價(jia) 1:320以上）可去除支原體(ti) 汙染，因特異抗體(ti) 可抑製支原體(ti) 生長，故經抗血清處理後11天即轉為(wei) 陰性，並且5個(ge) 月後仍為(wei) 陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經濟。
（三）加溫處理
將汙染的組織培養(yang) 物放在41℃培養(yang) 18小時，可殺死支原體(ti) ，但對細胞有不良影響。所以在處理前要進行預試驗，摸索能zui大限度殺死支原體(ti) 又對細胞影響zui小的加熱時間。此法有時不可靠。若先用藥物處理後，再以41℃加溫處理效果更佳。
（四）其他方法
除了上述去除汙染的方法外，還有動物體(ti) 內(nei) 接種除菌法、巨噬細胞吞噬法、汙染培養(yang) 瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等，但均較麻煩，且效果不確定。所以一旦支原體(ti) 汙染，除非有特別重要價(jia) 值，一般均棄之重新培養(yang) 。