一、酶聯免疫吸附法（ELISA）核小體(ti) 測定
凋亡細胞的DNA斷裂使細胞質內(nei) 出現核小體(ti) 。核小體(ti) 由組蛋白及其伴隨的DNA片斷組成，可由ELISA法檢測。
（一）檢測步驟
1、將凋亡細胞裂解後高速離心，其上清液中含有核小體(ti)
2、在微定量板上吸附組蛋白體(ti)
3、加上清夜使抗組蛋白抗體(ti) 與(yu) 核小體(ti) 上的組蛋白結合
4、加辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體(ti) 使之與(yu) 核小體(ti) 上的DNA結合
4、加酶的底物，測光吸收製。
（二）用途
該法敏感性高，可檢測5*100/ml個(ge) 凋亡細胞。可用於(yu) 人、大鼠、小鼠的凋亡檢測。該法不需要特殊儀(yi) 器，
二、DNA凝膠電泳
（一）、檢測原理
細胞發生凋亡或壞死，其細胞DNA均發生斷裂，細胞內(nei) 小分子量DNA片斷增加，高分子DNA減少，胞質內(nei) 出現DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規律的發生在核小體(ti) 之間，出現180－200bpDNA片斷，而壞死細胞的DNA斷裂點為(wei) 無特征的雜亂(luan) 片斷，利用此特征可以確定群體(ti) 細胞的死亡，並可與(yu) 壞死細胞區別。
（二）結果判斷
正常活細胞DNA 電泳出現階梯狀（LADDER）條帶；壞死細胞DNA電泳類似血抹片時的連續性條帶。
三、形態學觀察方法
1、HE染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形，胞核深染，胞質濃縮，染色質成團塊狀，細胞表麵有“出芽”現象。
2、丫啶橙（AO）染色，熒光顯微鏡觀察：活細胞核呈黃綠色熒光，胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內(nei) 側(ce) ，可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體(ti) 。
3、台盼藍染色：如果細胞膜不完整、破裂，台盼藍染料進入細胞，細胞變藍，即為(wei) 壞死。如果細胞膜完整，細胞不為(wei) 台盼藍染色，則為(wei) 正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性，區別壞死細胞有一定的幫助。
4、透射電鏡觀察：可見凋亡細胞表麵微絨毛消失，核染色質固縮、邊集，常呈新月形，核膜皺褶，胞質緊實，細胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體(ti) 和凋亡小體(ti) 被臨(lin) 近巨噬細胞吞噬現象。
四、流式細胞儀(yi) 定量分析
（一）檢測原理
細胞發生凋亡時，其細胞膜的通透性也增加，但是其程度介於(yu) 正常細胞與(yu) 壞死細胞之間。利用這一特點，被檢測細胞懸液用熒光素染色，利用流式細胞儀(yi) 測量細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞核凋亡細胞。
（二）應用價(jia) 值
流式細胞儀(yi) 檢測具有以下特點：
1）、檢測的細胞數量大，因此其反映群體(ti) 細胞的凋亡狀態比較準確
2）、可以做許多相關(guan) 性分析
3）、結合被檢測細胞的DNA含量的分析，可確定凋亡的細胞所處的細胞周期
（三）檢測形態學及細胞膜完整性的Hoechs-PI雙染色法
細胞發生凋亡時，其細胞膜的通透性液增加，但其程度介於(yu) 正常細胞和壞死細胞之間，利用這一特點，被檢測細胞懸液用熒光素染色，利用流式細胞儀(yi) 檢測細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞和凋亡細胞。
利用Hoechs-PI染色法，正常細胞對染料有抗拒性，熒光染色很淺，凋亡細胞主要攝取Hoecha染料，呈現強藍色熒光，而壞死細胞主要攝取碘化丙啶（PI）而呈強的紅色熒光。
（四）DNA片斷原位標記法
凋亡細胞DNA片斷原位末端檢測技術是指在細胞（或組織）結構保持不變的情況下，用熒光素、地高辛或生物素標記的脫氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate，DUTP）和末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）相反應與(yu) 凋亡細胞裂解後3·的羥基（－OH）端結合，經顯色反應後檢測DNA裂解點的技術。
DNA片段原位標記法有二種：
1、原位缺口轉移（in situ nick-translation,ISNT）技術，它是利用DNA多聚酶I將標記的核苷酸連接到斷裂DNA的3·－OH端
2、原位缺口末端標記技術（in situ end labelling technique,ISEL），即TUNEL法，它是利用TdT將標記的DUPT接到3·-OH端。研究證明，TUNEL法的敏感性遠高於(yu) ISNT，尤其對早期凋亡的檢測，TUNEL更為(wei) 合適。
（五）檢測細胞膜成分變化的Annexin V 聯合PI法
1、原理：在細胞凋亡早期位於(yu) 細胞膜內(nei) 側(ce) 的磷脂酰絲(si) 氨酸（PS）遷移至細胞膜外測。磷脂結合蛋白V（Annexin V）是一種鈣依賴性的磷脂結合蛋白，它於(yu) PS具有高度的結合力。因此，Annexin V可以作為(wei) 探針檢測暴露在細胞外測的磷脂酰絲(si) 氨酸。故利用對PS有高度親(qin) 和力的Annexin V，將Annexin V標記上熒光素（如異硫氰酸熒光素FITC），同時結合使用PI拒染法（因壞死細胞PS亦暴露於(yu) 細胞膜外測，且對PI高染）進行凋亡細胞雙染法後用流式細胞儀(yi) 即可檢測凋亡細胞。
2、結果判斷：正常活細胞Annexin V 、PI均低染；凋亡細胞Annexin V高染、PI低染；壞死細胞Annexin V/PI均高染。
3、應用價(jia) 值：細胞發生凋亡時，膜上的PS外露早於(yu) DNA斷裂發生，因此Annexin V聯合PI染色法檢測早期細胞凋亡較TUNEL法更為(wei) 靈敏。又Annexin V聯合PI染色不需固定細胞，可避免PI染色因固定造成的細胞碎片過多及TUNEL法因固定出現的DNA片段丟(diu) 失。因此，Annexin V聯合PI法更加省時，結果更為(wei) 可靠，是目前zui為(wei) 理想的檢測細胞凋亡的方法。