一、準備工作
準備工作對開展細胞培養(yang) 異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內(nei) 容包括器皿的清洗、幹燥與(yu) 消毒，培養(yang) 基與(yu) 其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超淨台的清潔與(yu) 消毒，培養(yang) 箱及其他儀(yi) 器的檢查與(yu) 調試，具體(ti) 內(nei) 容可參閱有關(guan) 文獻。
二、取材
在無菌環境下從(cong) 機體(ti) 取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養(yang) 器血中，這一過程稱為(wei) 取材。如是細胞株的擴大培養(yang) 則無取材這一過程。機體(ti) 取出的組織細胞的培養(yang) 稱為(wei) 原代培養(yang) 。理論上講各種動物和人體(ti) 內(nei) 的所有組織都可以用於(yu) 培養(yang) ，實際上幼體(ti) 組織（尤其是胚胎組織）比成年個(ge) 體(ti) 的組織容易培養(yang) ，分化程度低的組織與(yu) 分化高相比之下，分化程度低的組織的容易培養(yang) ，腫瘤組織比正常組織容易培養(yang) 。取材後應立即處理，盡快培養(yang) ，因故不能馬上培養(yang) 時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yang) 液中保存。取組織時應嚴(yan) 格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為(wei) 減少汙染可用抗菌素處理。由組織並分離分散細胞的方法可參閱有關(guan) 文獻。
三、培養(yang)
將取得的組織細胞接入培養(yang) 瓶或培養(yang) 板中的過程稱為(wei) 培養(yang) 。如係組織塊培養(yang) ，則直接將組織塊接入培養(yang) 器皿底部，幾個(ge) 小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yang) 基。如係細胞培養(yang) ，一般應在接入培養(yang) 器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養(yang) 器皿並直接加入培養(yang) 基。細胞進入培養(yang) 器皿後，立即放入培養(yang) 箱中，使細胞盡早進入生長狀態。正在培養(yang) 中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內(nei) 容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無汙染，培養(yang) 基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養(yang) 溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養(yang) 進入培養(yang) 後有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底後要進行傳(chuan) 代培養(yang) ，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩(liang) 到三瓶繼續培養(yang) 。每傳(chuan) 代一次稱為(wei) “一代”。二倍體(ti) 細胞一般隻能傳(chuan) 幾十代，而轉化細胞係或細胞株則可無限地傳(chuan) 代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅(jin) 有不死性（Immortality）而無惡性。培養(yang) 正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。
四、凍存及複蘇
為(wei) 了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為(wei) 二甲亞(ya) 碸或甘油）的培養(yang) 基，以一定的冷卻速度凍存，zui終保存於(yu) 液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。複蘇一般采用快融方法，即從(cong) 液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內(nei) 迅速融解。然後將細胞轉入培養(yang) 器皿中進行培養(yang) 。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及複蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。