目的要求：
1．掌握一般培養(yang) 基製備的原則和要求。
2．熟悉一般培養(yang) 基製備的過程。
操作步驟：
一、培養(yang) 基的製備原則和要求
培養(yang) 基是根據各類微生物生長繁殖的需要，用人工方法把多種物質混合而成的營養(yang) 物。一般用來分離、培養(yang) 菌類。常用的培養(yang) 基有基礎培養(yang) 基、增菌培養(yang) 基、選擇培養(yang) 基、鑒別培養(yang) 基和厭氧培養(yang) 基。在製備培養(yang) 基時，應掌握如下原則和要求：
（一）培養(yang) 基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養(yang) 物質。所用的化學藥品必須純淨，稱取的份量務必準確。
（二）培養(yang) 基的酸堿度應符合細菌生長要求。按各種培養(yang) 基要求準確測定調節pH值。多數細菌生長的適宜pH值為(wei) 7.2～7.6，呈弱堿性。
（三）培養(yang) 基的滅菌時間和溫度，應按照各種培養(yang) 基的規定進行，以保證滅菌效果及不損失培養(yang) 基的必需營養(yang) 成分。培養(yang) 基經滅菌後，必須置37℃溫箱中培養(yang) 24小時，無菌生長者方可應用。
（四）所用器皿須潔淨，忌用鐵或鋼質器皿，要求沒有抑製細菌生長的物質存在。
（五）製成的培養(yang) 基應該是透明的，以便觀察細菌生長性狀以及其他代謝活動所產(chan) 生的變化。
二、培養(yang) 基製備過程
不同的培養(yang) 基其製備方法也不同，一般包括以下步驟：
（一）準確稱量試劑 根據不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yang) 基，培養(yang) 基所需試劑必須純淨。
（二）校正pH值 將稱量好的培養(yang) 基各種成分放入容器內(nei) ，標記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N
NaOH和1N HCl調節pH值到適宜範圍內(nei) 。
（三）過濾 將玻璃漏鬥置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏鬥中，將上述培養(yang) 基倒入其中過濾至透明。
（四）分裝 將過濾後的培養(yang) 基分裝於(yu) 中試管或三角瓶內(nei) （試管內(nei) 每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包紮好，準備滅菌。
（五）滅菌
培養(yang) 基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yang) 細胞在水中煮沸後即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比幹熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體(ti) 吸收水分後，其蛋白質易於(yu) 凝固變性，因為(wei) 蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。
高壓蒸汽滅菌，一般采用15磅／平方（即1.05kg／cm2）壓力，此時的溫度是121.3℃。滅菌20～30分鍾後，可達到*滅菌的目的。在進行滅菌的時候，首先要把滅菌鍋內(nei) 的冷空氣排出，否則，冷空氣存在會(hui) 降低鍋內(nei) 的實際溫度，影響滅菌效果。
三、基礎培養(yang) 基的製備
（一）牛肉浸液（肉水）
1．成分 新鮮牛肉 500g ，水1000 ml。
2．製法
（1）取新鮮牛肉，剔除肌膜、脂肪，切成小塊，用絞肉機絞碎。
（2）按上述比例加水，浸泡過夜（夏天應將浸泡液放置在低溫的地方，防止腐敗；如果沒有冷藏條件時，可省去浸泡過夜這一步），其間應攪拌數次。
（3）次日取上液煮沸一小時，並不斷攪拌。
（4）補足蒸發的水分，用白布或絨布過濾後分裝於(yu) 三角瓶中，準備滅菌。
（5）置高壓滅菌器內(nei) ，15磅滅菌20～30分鍾，置低溫、暗處保存備用。
3.用途
用於(yu) 製備各種培養(yang) 基的基礎液。
（二）肉浸液肉湯（普通肉湯）
1．成分 肉水 1000 ml ，蛋白腖 10g，氯化鈉 5g，磷酸氫二鉀 2g。
2．製法
（1）將以上成份加溫溶於(yu) 牛肉浸液中。
（2）調pH值為(wei) 7.4～7.6。
（3）濾紙過濾後分裝。
（4）15磅20～30分鍾滅菌後備用。
3．用途 作一般細菌培養(yang) 用。
（三）營養(yang) 瓊脂培養(yang) 基（普通瓊脂）
1．成分 肉水 1000ml，蛋白腖10g，磷酸氫二鉀 lg ，氯化鈉 5g，瓊脂 20g。
2．製法
（1）將上述成分混合後，加熱溶解，補足水份。
（2）校正pH值7.4～7.6。
（3）用紗布夾棉花過濾。
（4）分裝於(yu) 中試管或三角瓶中。
（5）高壓滅菌20～30分鍾後，將中試管擺成斜麵，保存備用。
3．用途 一般細菌分離培養(yang) 、菌種保存或用作特殊培養(yang) 基。
（四）半固體(ti) 培養(yang) 基 基本上與(yu) 營養(yang) 瓊脂的製備相同，僅(jin) 將瓊脂量減少至0.5～0.7％（1000 ml中加5～7g瓊脂）即可。
（五）鮮血瓊脂
將滅菌的營養(yang) 瓊脂加熱溶化，冷卻至45～50℃時，加入5～8％無菌脫纖鮮血（綿羊、黃 牛、馬和兔等），分裝於(yu) 試管後立即擺成斜麵、或傾(qing) 注於(yu) 平皿中，待凝固後，置37℃培養(yang) 1～2日。有汙染者廢棄；無菌者保存，置冰箱備用。
無菌脫纖維鮮血的製備：以無菌操作采取動物鮮血（綿羊、黃 牛、馬從(cong) 頸靜脈采血；兔則從(cong) 心髒采血），放入帶玻璃珠的無菌三角瓶內(nei) ，搖動5～10分鍾，放冰箱中備用。