1)細胞株的培養(yang) 和傳(chuan) 代 培養(yang) : 用於(yu) 檢測細胞因子的細胞株通常培養(yang) 於(yu) 含10%小牛血清和抗生素的培養(yang) 液中,培養(yang) 細胞因子依賴細胞株還有加入適量細胞因子。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yang) 箱中培養(yang) ,3~4天傳(chuan) 代一次。 懸浮生長細胞的傳(chuan) 代: 直接直接吸去或離心後吸去培養(yang) 上清液,用新鮮培養(yang) 液懸浮細胞,1:3或1:5稀釋細胞後,分瓶繼續培養(yang) 。 帖壁生長細胞的傳(chuan) 代: 吸去培養(yang) 液,用PBS洗滌細胞一次,加入消化液,在37℃中消化約3~10分鍾,待細胞開始脫落時,倒去消化液,加入新鮮培養(yang) 液,懸浮和吹打分散細胞。也可以待細胞*消化脫落,500×g離心5分鍾,去除消化液,用新鮮培養(yang) 液懸浮細胞。1:3或1:5稀釋細胞後,分瓶繼續培養(yang) 。
2)細胞株的凍存: 1. 取培養(yang) 2~3天生長旺盛的細胞,用細胞培養(yang) 液將細胞配成2×106~2×107/ml。 2. 在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞(ya) 碸(或甘油),混勻後密封。置4℃ 1小時,-20℃ 2小時,然後直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜後浸入液氮中。
3)細胞株的複蘇: 複蘇時,從(cong) 液氮中取出凍存管,立即置37℃水浴中融化細胞。將細胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培養(yang) 液中,置37℃ 5%CO2飽和水汽二氧化碳培養(yang) 箱中培養(yang) 。懸浮細胞待細胞全部沉降後小心吸去上清液,更換新鮮的上述培養(yang) 液,繼續培養(yang) ;帖壁細胞則培養(yang) 2~3小時,待細胞帖壁後,倒去培養(yang) 液,更換新鮮的上述培養(yang) 液,繼續培養(yang) 。也可以在加入新鮮培養(yang) 液以後,500×g離心5分鍾,去上清液,加入新鮮培養(yang) 液,繼續培養(yang) 。