[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 在微孔板上預包被高純度基因重組HIV（1型十Ⅱ型），與(yu) 樣品中抗HIV抗體(ti) 反應，同時加入HRP標記HIV（1型+Ⅱ型）抗原。然後用TMB底物作用顯色。通過酶標儀(yi) 檢測吸光度（OD值）從(cong) 而判定樣品中HIV抗體(ti) 的存在與(yu) 否。
[標本準備] 靜脈抽血2ml，不抗凝
[試劑]
1．預包被微孔反應板條
2．酶標試劑
3．陰性對照
4．陽性對照
5．洗滌液
6．顯色劑A、B
[儀(yi) 器設備] 酶標儀(yi) 或全自動酶聯免疫檢測儀(yi) 。
[測定步驟]
1．將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照3孔，陽性對照2孔，空白1孔。
2．每孔加人酶標試劑100~1，空白孔除外。
3．分別在相應孔中加入待測樣品或陰性對照、陽性對照20ul，振蕩混勻。37℃環境中溫育60min。
4．棄去孔內(nei) 液體(ti) ，用洗滌液充分洗滌6遍，zui後一次盡量拍幹。
5．每孔加人顯色劑A、B液各50u1，輕輕振蕩混勻，置37℃環境中避光顯色10min。
6．每孔加終止液50gl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀(yi) 波長450nm（建議用雙波長檢測）測定各孔吸光度。
7．結果判定 樣品OD值≥臨(lin) 界值（cut off）者為(wei) HIV抗體(ti) 初篩陽性（注意：初篩陽性標本應重新取樣品進行雙孔複試，複試陽性者應按“全國HIV檢測管理規範”送HIV確認實驗室進行確認試驗）。樣品OD值<臨(lin) 界值（cutoff）者為(wei) HIV抗體(ti) 陰性。
[注意事項]
1．檢測單位必須是經當地衛生行政部門批準的HIV初篩實驗室。
2．檢測必須符合HIV實驗室管理規範和生物安全守則的規定，嚴(yan) 格防止交叉汙染。操作時必須戴手套、穿工作服，嚴(yan) 格健全地執行消毒隔離製度。所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理，終止液為(wei) 2mol／L硫酸，使用時必須注意安全。
3．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出同時應置室溫環境中平衡30min後方可使用，未用完的微孔條密封保存。
4．加液時必須用加液器，並經常校對加液器的準確性。
5．洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內(nei) 有遊離酶不能洗淨。使用洗板機洗滌應設定30～60s浸泡時間。
6．HIV抗體(ti) 檢測結果的判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準，建議用雙波長450／630nm檢測。
7．操作應按說明書(shu) 嚴(yan) 格進行，不同批次試劑不得混用。
[臨(lin) 床意義(yi) ] ELISA法HIVI型+Ⅱ型抗體(ti) 陽性提示可能為(wei) HIV感染，但須經有關(guan) 部門確認並須結合流行病學史和現病史診斷，同時送有國家認可資格的確認實驗室進行確認。