抗原與(yu) 抗體(ti) 發生特異性結合後,雖由親(qin) 水膠體(ti) 變為(wei) 疏水膠體(ti) ,若溶液中無電解質參加,仍不出現可見反應。為(wei) 了促使沉澱物或凝集物的形成,常用0.85%氯化鈉或各種緩衝(chong) 液作為(wei) 抗原及抗體(ti) 的稀釋液。由於(yu) 氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1-,可分別中和膠體(ti) 粒子上的電荷,使膠體(ti) 粒子的電勢下降。當電勢降至臨(lin) 界電勢(12~15mV)以下時,則能促使抗原抗體(ti) 複合物從(cong) 溶液中析出,形成可見的沉澱物或凝集物。影響抗原抗體(ti) 反應的因素主要有以下兩(liang) 點,另外,適當振蕩也可促進抗原抗體(ti) 分子的接觸,加速反應。
(一)溫度
在一定範圍內(nei) ,溫度升高可加速分子運動,抗原與(yu) 抗體(ti) 碰撞機會(hui) 增多,使反應加速。但若溫度高於(yu) 56℃時,可導致已結合的抗原抗體(ti) 再解離,甚至變性或破壞;在40℃時,結合速度慢,但結合牢固,更易於(yu) 觀察。常用的抗原抗體(ti) 反應溫度為(wei) 37℃。每種試驗都有其*的zui適反應溫度,例如冷凝集素在4左右與(yu) 紅細胞結合,20℃以上反而解離。
(二)酸堿度
抗原抗體(ti) 反應必須在合適的pH環境中進行。蛋白質具有兩(liang) 性電離性質,因此每種蛋白質都有固定的等電點。抗原抗體(ti) 反應一般在pH為(wei) 6~8進行。PH過高或過低都將影響抗原與(yu) 抗體(ti) 的理化性質,例如pH達到或接近抗原的等電點時,即使無相應抗體(ti) 存在,也會(hui) 引起顆粒性抗原非特異性的凝集,造成假陽性反應。