運輸和保存:
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與(yu) 客戶協商後選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝於(yu) 1.8ml的凍存管中,置於(yu) 裝滿幹冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞後請盡快解凍複蘇細胞進行培養(yang) ,如無法立刻進行複蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個(ge) 月。
2)T-25培養(yang) 瓶充滿*培養(yang) 基後進行常溫運輸;收到細胞後請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳(chuan) 代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yang) 瓶至於(yu) 培養(yang) 箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一.培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yang) 基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(you) 質胎牛血清,10%。
2)培養(yang) 條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲(chu) 存。
二、實驗要點及說明:
1.本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ,而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃,並經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養(yang) 皿,但不宜過大,以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。