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豚鼠T淋巴細胞的測定
更新時間:2012-02-14   點擊次數:1558次

玫瑰花環試驗,又稱為(wei) 花結試驗。是測定淋巴細胞數量和功能的一種方法。
人類T和B淋巴細胞表麵具有不同的受體(ti) 。由於(yu) 人類T淋巴細胞表麵具有與(yu) 綿羊紅細胞結合的受體(ti) ,能與(yu) 綿羊紅細胞非特異性結合,形成E花環,因此,T細胞也成為(wei) 紅細胞花瓣形成細胞。根據E—玫瑰花環形成率,可以間接判斷機體(ti) 細胞免疫力。目前,已廣泛應用於(yu) 臨(lin) 床,作為(wei) 測定人群免疫狀態的一個(ge) 指標。
材料:
1.肝素(100單位/毫升)
2.0.5%兔紅細胞懸液(用Hanks液配製)
3.吸收過的胎牛血清:
取經56℃30分鍾加熱滅活後的胎牛血清加半量壓積兔紅細胞混合後,37℃水浴20分鍾,2000轉/分離心10分鍾,取上清液即成。
4.Hanks液
5.豚鼠抗凝血
6.淋巴細胞分層液
7.滅菌注射器,針頭,試管,吸管等。
方法:
1.淋巴細胞提取
(1)取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀釋。加於(yu) 3毫升淋巴細胞分層液液麵之上。
(2)2000轉/分離心30分鍾,吸淋巴細胞層到另一試管中加5倍體(ti) 積的Hanks液洗1—2次,(1500轉/分離心10分鍾)棄上清即成。
1. 加吸收過的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔紅細胞懸液0.2毫升,於(yu) 淋巴細胞中。混合後,37℃水浴5分鍾。
2. 500轉/分離心5分鍾,放4℃冰箱中2小時後,棄大部分上清。
3. 染色及觀察輕輕懸浮沉積的細胞。向懸液中滴一滴美蘭(lan) 液,混合,10分鍾後取一滴放載玻片上,加蓋玻片鏡檢。高倍鏡或油鏡下計數200個(ge) 淋巴細胞,凡結合3個(ge) 或3個(ge) 以上的兔紅細胞者為(wei) 陽性,計算花環形成細胞的百分率。
 

 

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