抗酶抗體(ti) 的優(you) 點，在於(yu) 酶和抗體(ti) 結合時，不需要通過化學交聯劑交聯，抗體(ti) 的失活少。在酶複合物形成後，同時就具有酶的活性，遇到相應的底物即呈現催化顯色作用。必須注意，抗酶抗體(ti) 必須用與(yu) *抗體(ti) 同種來源的動物製備。

(一)抗酶抗體(ti) 的製備
於(yu) 家兔的兩(liang) 個(ge) 後足掌內(nei) 各注入弗氏*佐劑(含活卡介苗12mg/ml)和過氧化物(5mg/ml)
的等量混合乳化液0.5ml，兩(liang) 星期後，於(yu) 兩(liang) 側(ce) 膕淋巴結內(nei) 注入同樣液體(ti) 。一周後靜脈注射0.2ml~0.4ml，過氧化物酶液(同樣濃度), 並同樣強化2－3次,末次注射後一周驗血、分離血清即為(wei) 過氧化物酶抗體(ti) 。

(二)酶－抗酶複合物(PAP)的製備
1．取單價(jia) 特異性抗酶血清10ml，1.5×104r/min(4℃)離心20min，吸取上清。
2．於(yu) 上清液中滴加酶溶液(0.5mg/ml)直至不再產(chan) 生沉澱,靜置1h，1.5×104r/min離心20min。
3．將沉澱物用冷生理鹽水125ml洗三次，每次1.5×104r/min離心20min。
4．於(yu) 冰浴下，將沉澱物懸混於(yu) 4ml HRP(2mg/ml)中。
5．在pH計監測下，邊攪拌邊加0.1Mol/L或0.01Mol/L HCl至pH 2.3。此時沉澱已全部溶解，1.5×104r/min離心20min。
6．吸取上清，用0.1Mol/L NaOH調pH至7.4。
7．量體(ti) 積，加入1/10容量的0.075Mol/L醋酸鈉和0.15Mol/L醋酸銨的等量混合液。
8．逐滴加入等體(ti) 積的100%飽和硫 酸銨，攪拌20min。1.5×104r/min離心20min。
9．將沉澱物用50%飽和硫 酸銨洗1次，同樣離心。
10．將沉澱物懸混於(yu) 5ml蒸餾水中，以pH6.75緩衝(chong) 鹽水透析3天，每天換水1次。(緩衝(chong) 鹽水由1.35×104ml生理鹽水, 25ml 1.5Mol/L醋酸鈉和75ml 2Mol/L醋酸銨配成)。
11．1.5×104r/min(4℃)離心20min，吸取上清，於(yu) OD280nm和OD403nm測定,計算IgG和酶含量及克分子比值。
12．按0.1ml分裝，-20℃保存。
13．應用時從(cong) 低溫冰箱中取出,立即在37℃水浴中融化