大鼠（Rat）基質金屬蛋白酶9 （MMP-9） ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅(jin) 供研究使用 標本：血清或血漿

試驗原理：
MMP-9試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知MMP-9濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nei) 進行檢測。先將MMP-9和生物素標記的抗體(ti) 同時溫育。洗滌後，加入親(qin) 和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然後加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chan) 生顏色。顏色的深淺和樣品中MMP-9的濃度呈比例關(guan) 係。

試劑盒內(nei) 容及其配製
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配製
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：800ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書(shu) 進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩衝(chong) 液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗MMP-9抗體(ti) 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親(qin) 和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩衝(chong) 液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書(shu) 進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型大鼠（Rat）基質金屬蛋白酶9 （MMP-9） ELISA 檢測試劑盒
 

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體(ti) ，請盡快用水衝(chong) 洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書(shu) 儲(chu) 存，使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟(diu) 棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉汙染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍幹，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書(shu) 中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。大鼠（Rat）基質金屬蛋白酶9 （MMP-9） ELISA 檢測試劑盒
 

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管。收集血液後，1000×g離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於(yu) 檢測。1000×g離心30分鍾去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鍾去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鍾，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的係列稀釋應在實驗時準備，不能儲(chu) 存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
800 ng/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 ng/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ng/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。大鼠（Rat）基質金屬蛋白酶9 （MMP-9） ELISA 檢測試劑盒
 

洗滌緩衝(chong) 液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體(ti) 產(chan) 生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chan) 生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋後加入50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。
加入稀釋好後的標準品50ul於(yu) 反應孔、加入待測樣品50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。立即加入50ul的生物素標記的抗體(ti) 。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親(qin) 和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。
甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鍾。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
標準品濃度（ng/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品大鼠（Rat）基質金屬蛋白酶9 （MMP-9） ELISA 檢測試劑盒
 

局限
6號標準品以上的結果為(wei) 非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小於(yu) 1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數R值為(wei) 0.990。
2. 特異性：不與(yu) 其它細胞因子反應。
3. 重複性：板內(nei) 、板間變異係數均小於(yu) 10%。

結 果 判 斷 與(yu) 分 析
1、儀(yi) 器值：於(yu) 波長450nm的酶標儀(yi) 上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為(wei) 縱坐標（Y），相應的MMP-9標準品濃度為(wei) 橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的MMP-9含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值範圍：0-800ng/ml

4、敏感度： 1.0 ng/ml