包括以下步驟：

(1)將參照基因與(yu) 待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(ge) 質粒載體(ti) 上，構建一種可同時用於(yu) 參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，並將所得標準品按照濃度梯度稀釋後同時用於(yu) 繪製參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與(yu) 步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增後，目的基因與(yu) 參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與(yu) 參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為(wei) ：將參照基因與(yu) 待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(ge) 質粒載體(ti) 上，構建一種可同時用於(yu) 參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，並將所得標準品按照濃度梯度稀釋後同時用於(yu) 繪製參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為(wei) 本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優(you) 選地為(wei) RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體(ti) 為(wei) 本領域常規質粒載體(ti) ，較佳地為(wei) PCR克隆載體(ti) ，優(you) 選地為(wei) TA cloning載體(ti) ，所述TA cloning載體(ti) 較佳地為(wei) pMD18-T載體(ti) 。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為(wei) 1：1。由於(yu) 標準品中待測目的基因與(yu) 參照基因的比例為(wei) 1:1，解決(jue) 了目前相對標準曲線法應用中目的基因與(yu) 參照基因的濃度比例關(guan) 係難以控製的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。

步驟(2)為(wei) ：待測樣本與(yu) 步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增後，目的基因與(yu) 參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與(yu) 參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為(wei) 本領域常規待測目的基因，較佳地為(wei) 腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為(wei) HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為(wei) 本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為(wei) 多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為(wei) 雙通道熒光定量PCR擴增。