實驗規則:
1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但有專(zhuan) 業(ye) 人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體(ti) 後,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從(cong) 冰箱中取出,使各種試劑都恢複到室溫,以使結果更穩定。
4、實驗時,要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體(ti) 時速度不能太快,以免產(chan) 生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體(ti) 時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體(ti) 加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內(nei) 液體(ti) 接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(hui) 自然流下去。
8、液體(ti) 全部加完後,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體(ti) 。也可以用酶標儀(yi) 的晃動功能。
9、應盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數據的準確性。
10、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體(ti) 係中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個(ge) PCR進程,*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩(liang) 類,探針類是利用與(yu) 靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chan) 物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。