常用培養(yang) 基配方

01 糖發酵管
成分:
牛肉膏 5g
蛋白腖 10g
氯化鈉 3g
磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 2g
0.2%滇麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
製法:
1葡萄糖發酵管按上述成分配好後,按0.5%加入葡萄糖,分裝於(yu) 有一個(ge) 倒置小管的小試管內(nei) ,121℃高壓滅菌15min.
2其他各種糖發酵管可按上述成分配好後,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌.將5mL糖溶液加入於(yu) 100mL培養(yang) 基內(nei) ,以無菌操作分裝小試管. 
注:蔗糖不純,加熱後會(hui) 自行水解者,應采用過濾法除菌.
試驗方法:從(cong) 瓊脂斜麵上挑取小量培養(yang) 物接種,於(yu) 36℃±1℃培養(yang) ,一般觀察2～3d.遲緩反應需觀察14～30d.

02 ONPG培養(yang) 基
成分:
鄰硝基酚β-D-半乳糖昔（ONPG） 60mg
（O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）
0.01mol/L磷酸鈉緩衝(chong) 液（pH7.5） 10mL
1%蛋白腖水（PH7.5） 30mL
製法:將ONPG溶於(yu) 緩衝(chong) 液內(nei) ,加入蛋白腖水,以過濾法除菌,分裝於(yu) 10mm×75mm試管,每管0.5mL,用橡皮塞塞緊.
試驗方法:自瓊脂斜麵上挑取培養(yang) 物1滿環接種,於(yu) 36±1℃培養(yang) 1～3h和24h觀察結果.如果β-半乳糖苷酶產(chan) 生,則於(yu) 1～3h變黃色,如無此酶則24h不變色.

03 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yang) 基
成分:
氯化鈉 5g 
硫酸鎂（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
檸檬酸鈉 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
製法:先將鹽類溶解於(yu) 水內(nei) ,校正pH,再加瓊脂,加熱溶化.然後加入指示劑,混合均勻後分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜麵.
試驗方法:挑取少量瓊脂培養(yang) 物接種,於(yu) 36±1℃培養(yang) 4d,每天觀察結果.陽性者斜麵上有菌落生長,培養(yang) 基從(cong) 綠色轉為(wei) 藍色. 

04 緩衝(chong) 葡萄糖蛋白腖水（MR和VP試驗用）
成分:
磷酸氫二鉀 5g
多腖 7g
葡萄糖 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
製法:溶化後校正pH,分裝試管,每管1mL,121℃高壓滅菌15min.
甲基紅（MR）試驗:自瓊脂斜麵挑取少量培養(yang) 物接種本培養(yang) 基中,於(yu) 36±1℃培養(yang) 2～5d,哈夫尼亞(ya) 菌則應在22～25℃培養(yang) .滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結果.鮮紅色為(wei) 陽性,黃色為(wei) 陰性.甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶於(yu) 30mL95%乙醇中,然後加入20mL蒸餾水.
V-P試驗:用瓊脂培養(yang) 物接種本培養(yang) 基中,於(yu) 36±1℃培養(yang) 2～4d.哈夫尼亞(ya) 菌則應在22～25℃培養(yang) .加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL,充分振搖試管,觀察結果.陽性反應立刻或於(yu) 數分鍾內(nei) 出現紅色,如為(wei) 陰性,應放在36±1℃下培養(yang) 4h再進行觀察.

05克氏檸檬酸鹽培養(yang) 基
成分:
檸檬酸鈉 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
單鹽酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氫鉀 1g
氯化鈉 5g
0.2%酚紅溶液 6mL
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
製法:加熱溶解,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜麵.
試驗方法:用瓊脂培養(yang) 物接種整個(ge) 斜麵,在36±1℃培養(yang) 7d,每天觀察結果.陽性者培養(yang) 基變為(wei) 紅色.

06 丙二酸鈉培養(yang) 基
成分:
酵母浸膏 1g
硫酸銨 2g
磷酸氫二鉀 0.6g
磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2g
丙二酸鈉 3g
0.2%溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH6.8
製法:先將酵母浸膏和鹽類溶解於(yu) 水,校正pH後再加入指示劑,分裝試管,121℃高壓滅菌15min. 
試驗方法:用新鮮的瓊脂培養(yang) 物接種,於(yu) 36±1℃培養(yang) 48h,觀察結果.陽性者由綠色變為(wei) 藍色.

07 葡葡糖銨培養(yang) 基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
葡萄糖 2g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
製法:先將鹽類和糖溶解於(yu) 水內(nei) ,校正pH,再加瓊脂,加熱溶化,然後加入指示劑,混合均勻後分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜麵.
試驗方法:用接種針輕輕觸及培養(yang) 物的表麵,在鹽水管內(nei) 做成極稀的懸液,肉眼觀察不見混濁,以每一接種環內(nei) 含菌數在20～100之間為(wei) 宜.將接種環滅菌後挑取菌液接種,同時再以同法接種普通斜麵一支作為(wei) 對照.於(yu) 36±1℃培養(yang) 24h.陽性者葡萄糖銨斜麵上有正常大小的菌落生長;陰性者不生長,但在對照培養(yang) 基上生長良好.如在葡萄糖銨斜麵生長極微小的菌落可視為(wei) 陰性結果.
注:容器使用前應用清潔液浸泡.再用清水,蒸餾水衝(chong) 洗幹淨,並用新棉花做成棉塞,幹熱滅菌後使用.如果操作時不注意,有雜質汙染時,易造成假陽性的結果.