豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) （PRVGE-Ab）酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書(shu)

本試劑盒僅(jin) 供研究使用。

檢測範圍：                                                          96T

6ng/L -160 ng/L

使用目的：

本試劑盒用於(yu) 測定豬血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) （PRVGE-Ab）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) （PRVGE-Ab）水平。用純化的抗原包被微孔板，製成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) （PRVGE-Ab），再與(yu) HRP標記的抗原結合，形成抗原-抗體(ti) -酶標抗原複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) （PRVGE-Ab）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) （PRVGE-Ab）濃度。豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) 酶聯免疫分析試劑盒 

試劑盒組成 

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（320ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書(shu)	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個(ge)

標本要求 

1．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) 酶聯免疫分析試劑盒

160ng/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
80ng/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
40ng/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
20ng/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
10ng/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 

7. 溫育：操作同3。豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) 酶聯免疫分析試劑盒

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行。

計算

  以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) 酶聯免疫分析試劑盒 

注意事項

1．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在5分鍾內(nei) ，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於(yu) 標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。豬偽(wei) 狂犬病毒GE抗體(ti) 酶聯免疫分析試劑盒

10. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(ge) 月