ELISA 中的抗原與(yu) 抗體(ti) 的反應

1、可逆性 抗原與(yu) 抗體(ti) 結合形成抗原抗體(ti) 複合物的過程是一種動態平衡，其反應式為(wei) ：Ag+Ab→Ag•Ab.。抗體(ti) 的親(qin) 和力（affinity）是抗原抗體(ti) 間的固有結合力，可以平衡常數K表示：K=[Ag•Ab]／[Ag][Ab]。Ag•Ab的解離程度與(yu) K值有關(guan) 。高親(qin) 和力抗體(ti) 的抗原結合點與(yu) 抗原的決(jue) 定簇在空間構型上非常適合，兩(liang) 者結合牢固，不易解離。解離後的抗原或抗體(ti) 均能保持原有的結構和活性，因此可用親(qin) 和層析法來提純抗原或抗體(ti) 。在抗血清中，特異性的IgG抗體(ti) 僅(jin) 占總IgG中的極小部分。用親(qin) 和層析法提取的特異性抗體(ti) ，稱為(wei) 親(qin) 和層析純抗體(ti) ，應用於(yu) 免疫測定中可得到更好的效果。

2、zui適比例 在恒定量的抗體(ti) 中加入遞增量的抗原形成抗體(ti) 複合物（沉澱）的量見圖1-4.曲線的高峰部分是抗原抗體(ti) 比例zui合適的範圍，稱為(wei) 等價(jia) 帶（zone of equivalence）。在等價(jia) 帶前後分別為(wei) 抗體(ti) 過剩帶和抗原過剩帶。如果抗原或抗體(ti) 極度過剩，則無沉澱物形成，在免疫測定中稱為(wei) 帶現象（zone phenomenon）。抗體(ti) 過量稱為(wei) 前帶（prezone），抗原地過量稱為(wei) 後帶（postzone）。在用免疫學方法測定抗原時，應使反應係統中有足夠的抗體(ti) 量，否則測得的量會(hui) 小於(yu) 實際含量，甚至出現假陰性。

3、特異性 抗原抗體(ti) 的結合實質上隻發生在抗原的抗原決(jue) 定簇與(yu) 抗體(ti) 的抗原結合位點之間。由於(yu) 兩(liang) 者在化學結構和空間構型上呈互補關(guan) 係，所以抗原抗體(ti) 反應具有高度的特異性。例如乙肝病毒中的表麵抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）和核心抗體(ti) （HBcAg），雖來源於(yu) 同一病毒，但僅(jin) 與(yu) 其相應的抗體(ti) 結合，而不與(yu) 另外兩(liang) 種抗體(ti) 反應。抗原抗體(ti) 反應的這種特異性使免疫測定能在一非常複雜的蛋白質化合物（例如血清）中測定某一特定的物質，而不需先分離待檢物。

但是這種特異性也不是的。假使兩(liang) 種化合物有著部分相同的結構，在抗原抗體(ti) 反應中可出現交叉反應。例如：絨毛膜促性腺激素（hCG）和黃體(ti) 生成激素（LH）均由α和β兩(liang) 個(ge) 亞(ya) 單位組成，其結構的不同處在β亞(ya) 單位，而兩(liang) 者的α亞(ya) 單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩(liang) 種抗體(ti) ，抗α-hCG抗體(ti) 將與(yu) LH發生交叉反應。在臨(lin) 床檢驗中，如用抗hCG抗血清作為(wei) 妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG，隻能用於(yu) hCG濃度較高的試驗，否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與(yu) 之發生交叉反應。因此在作為(wei) 早孕診斷（敏感度應達到50mIu/mlhCG）的實際中必須應用隻對hCG特異的抗β-hCG，以避免與(yu) 其它激素的交叉反應的發生。

4、敏感性 在測定血清中某一物質的含量時，化學比色法的敏感度為(wei) mg/ml水平，酶反應測定法的敏感度約為(wei) 5~10μg/ml，免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與(yu) 酶反應法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數千倍，達ng/ml水平。例如，用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg，其敏感度可達0.1ng/ml.