奶牛胰高血糖素樣肽1(GLP-1)酶聯免疫分析試劑盒操作及注意事項
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。
4.8 pmol/L | 5 號標準品 | 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
2.4 pmol/L | 4 號標準品 | 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
1.2 pmol/L | 3 號標準品 | 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
0.6pmol/L | 2 號標準品 | 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
0.3pmol/L | 1 號標準品 | 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘(yu) 各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl, 然後再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為(wei) 5 倍)。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體(ti) ,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒後棄去,如此 重複 5 次,拍幹。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鍾.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液後 15 分鍾以內(nei) 進行。
計算
以標準物的濃度為(wei) 橫坐標,OD 值為(wei) 縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與(yu) OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數, 即為(wei) 樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控製在 5 分鍾內(nei) ,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,zui好做複孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值 大於(yu) 標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)後再測定,計 算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜隻限一次性使用,以避免交叉汙染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。