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豚鼠免疫球蛋白G ELISA 檢測試劑盒操作及注意
更新時間:2012-07-17   點擊次數:1331次

豚鼠免疫球蛋白G ELISA 檢測試劑盒操作及注意

操作注意事項

1. 試劑應按標簽說明書(shu) 儲(chu) 存,使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟(diu) 棄,不可保存。

2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4. 使用一次性的吸頭以免交叉汙染,吸取終止液和底物AB液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5. 使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。

6. 洗滌酶標板時應充分拍幹,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露於(yu) 光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。

8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9. 按照說明書(shu) 中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

操作步驟

1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體(ti) 產(chan) 生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chan) 生加樣上的誤差。

2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定,能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液11稀釋後加入50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。

3. 加入稀釋好後的標準品50ul於(yu) 反應孔、加入待測樣品50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。立即加入50ul的生物素標記的抗體(ti) 。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

4. 甩去孔內(nei) 液體(ti) ,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

5. 每孔加入80ul的親(qin) 和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鍾。

6. 甩去孔內(nei) 液體(ti) ,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

7. 每孔加入底物AB50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鍾。避免光照。

8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液後應立即測定結果。

9. 450nm波長處測定各孔的OD值。

 

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